在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时，还应考虑***的吸收，可在加入***的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450nm的吸光度作为空白对照。·金属对CCK-8显色有影响：当终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会***5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10mM的话，将会*****。·悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。·加入CCK-8时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色或pH值已变化，建议换用新鲜的培养基。·用酶标仪检测前需确保每个孔内没有...

细胞增殖-毒性检测1.在96孔板中配制100ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃，5%CO2的条件下)。2.向培养板加入10ml不同浓度的待测物质。3.将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6,12,24或48小时)。4.向每孔加入10mlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。5.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。7.如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10ml0.1MHCl溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。注意：如果...

3、24小时后，吸出培养基，对照组和空白组每孔各加入100ul无血清培养基，实验组每孔加入100ul基础培养基配制的***，继续作用12或24小时；4、***作用完毕后，每孔加入50ulMTT,继续作用4小时；5、弃掉每孔中的MTT，每孔加入150ul的DMSO或异丙醇。然后震荡10分钟，使孔底的紫色结晶充分溶解；6、在酶联免疫机器上测定吸光度，波长为550nm或490nm。7、细胞存活率=（实验组吸光度值-空白组吸光度值）/(对照组吸光度值-空白组吸光度值)***。这个CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8.湖北碧云天cck8在做一些***毒性试验时，比如做铁死亡途径时...

统一铺好后，待细胞完全沉淀下来后，在显微镜下观察各实验组的细胞密度，如果密度不均匀，则固定一组，微调其他组细胞的量再次铺板（如：发现NC组细胞较多，降低细胞量再次铺板），放入细胞培养箱中培养。4.从铺板后第二天开始，每孔加入10-20μlCCK-8溶液，如果每孔的培养基为100μl，则加入10μlCCK-8溶液，如果每孔的培养基为200μl，则加入20μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。CCK-8用途：***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验.江苏悬浮细胞cck8 CCK8原理...

用途： ***筛选、 细胞增殖测定、 细胞毒性测定、 **药敏试验等。 所需设备及仪器： 10ul，100-200ul及多通道移液器 酶标仪（带有450nm滤光片） 96孔培养板 二氧化碳培养箱 培养0.5-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认比较好条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。 测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。 所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的...

CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较检测方法MTT法XTT法WST-1法CCK法甲臜产物的水溶性差（需加有机溶剂溶解再检测）好好好产品性状粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用现配现用即开即用即开即用检测灵敏度高很高很高高检测时间较长较短较短**短检测波长560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm细胞毒性高，细胞形态完全消失很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变试剂稳定性一般较差一般很好批量样品检测可以非常适合非常适合非常适合便捷程度一般便捷便捷非常便捷MTT与CCK8比色法的实验细节和注意事项.浙江cck8 dojindo 说明...

切记一定要使用无血清的基础培养基，一是可以排除血清对细胞生长的影响；二是血清的存在会对吸光度的测量产生影响。以上是MTT比色法的介绍，MTT比色法因为涉及到吸出培养基溶解沉淀的操作，所以更适用于贴壁细胞，悬浮细胞比较好选用CCK8检测细胞增殖，下面给大家介绍一下CCK8操作的注意事项。CCK8实验操作CCK8的优势在于对细胞没有毒性，可以直接加入细胞中长时间孵育，而不用考虑试剂本身对细胞带来的影响。向各孔中加入10ul的CCK-8检测溶液。如若检测的细胞增殖或毒性试验，需在此之前加入作用***培养适当时间，例如6h/12h/24h等，然后再加入CCK8检测液。CCK-8用途：***筛选、细胞增...

再此，给大家分享个小事情，有次，因为实验时间点已经到，但是盒子不够，我们就用了某天的CCK-8试剂盒，***出来的结果如图3。这个结果是我所不能接受的。后来用Sigma的再重复了一次，如图4，这种有深有浅的才是该有的结果。我想说的是在有能力选择范围内，尽量选择好一点的试剂，免得浪费时间。后来博士换了导师，换了课题，没有再用Sigma的了，用了一个日本的牌子，名字和货号如下，结果只能说justsoso，肯定没有Sigma的好用。二次对细胞毒性小；6、为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。 缺点.江苏cck8实验原理曲线统一铺好后，待细胞完全沉淀下来后，在显微镜下观察各实验组的细胞密度，如果密度不均匀，...

特点不同1、CellCountingKit-8：灵敏度高，数据可靠，重现性好；操作简便，省时省力；水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞；无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低；适合于高通量***筛选。2、MTT法：特点是灵敏度高、经济。三、应用不同1、CellCountingKit-8：主要用途为***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验。2、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗*****筛选、细胞毒性试验以及**放射敏感性测定等。CCK8的实验步骤、实验分组及检测方法.江苏cck8吸光度小于0.1但有趋势。一般情况下，**外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔...

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现，如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响，基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以，***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。MTT实验操作1、在96孔板中培养细胞，设置对照组（细胞+无血清培养基）、实验组和空白组（无血清培养基），可以采用如下图的排版方式：2、在对照组和实验组中，每孔加入细胞悬液100ulCCK-8试剂中含有WST–8.浙江cck8细胞活性 CCK-8的原理 所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞...

细菌***对CCK8检测的影响：我们做***的，经常会做到细菌或***对细胞的影响。那这种情况下我们应该怎么办。其实细菌防御系统还是非常强大，单独和CCK-8在一起孵育时，不会发生还原反应，几乎不会和细菌发生显色反应。而细菌不需要入胞繁殖，所以结果还是可信的。**讨厌的就是***，我不知道有多少人是做***的。***是需要入胞繁殖的，而且需要借助细胞的东西来进行繁殖。繁殖过程中就需要消耗宿主的能量，会产生氧化还原反应，所以我用CCK-8来测定***对细胞活性的影响或者某个***对***复制的影响时，我都小心翼翼的测很多个时间点，说实话，效果不是很好。所以我比较喜欢中性红。细胞增殖与毒性检测实验...

CCK8检测细胞增殖和毒性实验佰欧晶生物专注于生命科学、医学及药学科研咨询和技术服务，致力于疾病关键基因功能研究，中药功能及机理研究，纳米靶向***研究，**研究整体方案服务。CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活...

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了，这个时间细胞已经贴壁完全，而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间，我的实验摸了3个时间，24h，48h，72h。然后根据数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（1.0左右）这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了，细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量，说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题：假设我要孔内是200微升的体系，即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢，还是细胞悬液+药液=200微升，cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人...

注意事项1、细胞密度：MTT要检测的只是细胞的增殖能力，所以不用保证孔内细胞铺板一定要均匀，只要保证孔与孔之间的细胞数量大致相同就可，也因此细胞重悬很重要。每孔加入之前，都需要吹打混匀细胞，但即便如此也很难保证每个孔的细胞数量大致一致。所以我们设置了6组实验组，以便计算结果时可以有所取舍。2、对于MTT而言，预实验很重要。预实验要摸清楚两点：a)细胞该如何稀释；b)***浓度。网上很多人建议将细胞数稀释到某个数值才是**合适的，但我认为只要保证每个孔内的细胞数在70%左右，且各个孔内细胞数量大致相同就可，不需要强求一定要达到某个数值，现实中，这一步需要多次摸索。CCK8系列简称终于来了.北京c...

再此，给大家分享个小事情，有次，因为实验时间点已经到，但是盒子不够，我们就用了某天的CCK-8试剂盒，***出来的结果如图3。这个结果是我所不能接受的。后来用Sigma的再重复了一次，如图4，这种有深有浅的才是该有的结果。我想说的是在有能力选择范围内，尽量选择好一点的试剂，免得浪费时间。后来博士换了导师，换了课题，没有再用Sigma的了，用了一个日本的牌子，名字和货号如下，结果只能说justsoso，肯定没有Sigma的好用。二次主要是重复性优于MTT；上海cck8原理特点不同1、CellCountingKit-8：灵敏度高，数据可靠，重现性好；操作简便，省时省力；水溶性，不需要换液，尤其适合...

在做每个东西之前，都要搞清楚这个东西是什么。CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8，也就是进行细胞计数的一个盒子。那它的用途也就大致可以猜到，和细胞增殖相关的实验都可以。CCK-8的原理在CCK-8试剂盒中，**主要的化学药品是WST-8，化学名为2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐。它的**基团和MTT是一样的，是MTT的升级版本。在电子耦合试剂（也就是细胞是活的，有呼吸，有能量代谢）存在的情况下，可被NAD+氧化还原成为水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan)。活细胞越多，产生的Formazan就越多，颜色...

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了，这个时间细胞已经贴壁完全，而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间，我的实验摸了3个时间，24h，48h，72h。然后根据数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（1.0左右）这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了，细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量，说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题：假设我要孔内是200微升的体系，即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢，还是细胞悬液+药液=200微升，cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人...

CCK-8的原理 所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢，因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低，有些细胞在***处理后，可能活细胞数不变，但是代谢率低了以后，细胞呼吸减弱，NAD+产生减少，测出的Formazan也会减少，所以此时怎么算呢（此时我就比较怀恋中性红了）？当然也有解决的办法，下期给大家介绍。因此可利用这个原理进行细胞增殖和毒性分析，在吸光度为450时检测读数。颜色也会越深 主要是重复性优于MTT；湖北cck8检测实验原理：CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该...

CCK8检测细胞增殖和毒性实验佰欧晶生物专注于生命科学、医学及药学科研咨询和技术服务，致力于疾病关键基因功能研究，中药功能及机理研究，纳米靶向***研究，**研究整体方案服务。CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活...

7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。活力计算：保存条件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。在CCK-8试剂盒中，**主要的化学药品是WST-8.浙江cck8同仁一直都像个新手，从未老道过。所有新手的迷茫与无奈我**能体会...

cck8试剂加入后孵育时间，随着时间的增加，OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。这里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。 再说一下关于种板设置问题。众所周知周围一圈孔因为边缘效应都是不用来做实验的。一般每组样品我会设置6个复孔，得到的OD值去掉**大值与**小值，其余取平均值。我用的是排***，会省很多力气，但是也会增大组内误差。这个只有通过校正移液***和选用**适***头了。 能力有限，表达不清的大家凑合着看看吧。有疑问的欢迎大家留言讨论，我们的目标是共同进步，哈哈。 换液的意思是将cck8加在培养基中以换液的形式加在孔板中避免气泡产生。江苏cck8 凯...

CCK-8没有具体规定反应时间的长短，以具体反映比较好显色的时间为主。因为不同的细胞反应时间、显色标准都不一样，所以一定要设置预实验。预实验中，可以先做几个孔摸索一下接种数量和培养时间。3、悬浮细胞比贴壁细胞难显色。在加入CCK-8培养后，可每隔一小时观测一下颜色的变化情况，或者之间用酶标仪检测更为准确。4、CCK8作用时间越长，OD值就越大，所以对于作用时间也不是越长久越好，要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求检测孔内不能有气泡。在CCK-8试剂盒中，**主要的化学药品是WST-8.北京cck8标准曲线五、实验注意事项：·若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的H...

7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。活力计算：保存条件：4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。湖北细胞增殖 cck8cck8试剂加入后孵育时间，随着时间...

CKK-8原理 CellCountingKit，CCK-8试剂含有WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），是近年新开发的一种更新的水溶性四唑盐检测，原理与WST-1类似：在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原成具有高度水溶性的橙黄色甲臜产物（Formazan）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比，用酶联免疫分析仪测定其光吸收值可间接反映活细胞数量，在一定细胞数量范围内甲臜形成的量与细胞数成正比。 酚红和血清对CCK法的检测不会...

CCK-8（CellCountingKit-8）细胞活性和增殖检测是医学研究中常用的实验技术，其原理是该试剂中含有WST-8，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。以下是CCK-8检测的具体步骤：细胞活性检测1.在96孔板中接种细胞悬液(100ml/孔)。将培养板放在培养箱预培养(在37℃，5%CO2的条件下)。若细胞培养时间较长，培养基颜色或 pH 发生变化，建议更换培养基后再加 CC...

在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，对于大多数情况孵育2小时左右就可以了。6.用酶标仪测定在450nm处的吸光度（使用酶标仪之前要提前开启10min预热）测定完成后，保存数据。7.连续五天检测，每天保持一样的时间点加入CCK-8溶液，在培养箱内孵育时间相同。注：若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更...

五、实验注意事项：·若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。·如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉***影响。当然***影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。·当使用标准96孔板时，贴壁细胞的**小接种量至少为1,000个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500个/...

没有做过MTT实验，但其实原理及目的都是一样的（反应机理不一样）。都说CCK8简单点而且数据更稳定，所以就用了这个试剂盒。CCK8的说明书大家一定要认真阅读，里面很多细节的问题都有提到。而且说明书里提供的一些关于各种细胞的种板数都很有参考价值，因为那是反复验证过的比较好数值。但无论如何，做这个试验一定要摸条件。你就算再懒，这个懒不得，否则你都只是在做无用功。以下言论全部以细胞毒性试验为前提，如果你做的是促进细胞生长的***的药效实验那就另当别论了。这个CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8.上海cck8与ic50在做每个东西之前，都要搞清楚这个东西是什么。CCK-8的英文...

细菌***对CCK8检测的影响：我们做***的，经常会做到细菌或***对细胞的影响。那这种情况下我们应该怎么办。其实细菌防御系统还是非常强大，单独和CCK-8在一起孵育时，不会发生还原反应，几乎不会和细菌发生显色反应。而细菌不需要入胞繁殖，所以结果还是可信的。**讨厌的就是***，我不知道有多少人是做***的。***是需要入胞繁殖的，而且需要借助细胞的东西来进行繁殖。繁殖过程中就需要消耗宿主的能量，会产生氧化还原反应，所以我用CCK-8来测定***对细胞活性的影响或者某个***对***复制的影响时，我都小心翼翼的测很多个时间点，说实话，效果不是很好。所以我比较喜欢中性红。cck8试剂盒原理是什...