您好,欢迎访问

商机详情 -

江苏cck8吸光度小于0.1但有趋势

来源: 发布时间:2022年01月24日

特点不同1、CellCountingKit-8:灵敏度高,数据可靠,重现性好;操作简便,省时省力;水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞;无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低;适合于高通量***筛选。2、MTT法:特点是灵敏度高、经济。三、应用不同1、CellCountingKit-8:主要用途为***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验。2、MTT法:***用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗*****筛选、细胞毒性试验以及**放射敏感性测定等。CCK8的实验步骤、实验分组及检测方法.江苏cck8吸光度小于0.1但有趋势

。一般情况下,**外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。在培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时,还应考虑***的吸收,可在加入***的培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度作为空白对照。金属对CCK-8显色有影响:当终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会***5%、15%、90%的显色反应,使灵敏度降级。如果终浓度是10 mM的话,将会*****。悬浮细胞由于染色比较困难,一般需要增加细胞数量和延长培养时间。浙江同仁 cck8用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。

实验材料及试剂96孔板、CO2培养箱、酒精灯、移液***、酶标仪等;细胞、CCK8等。实验内容取生长状态良好的对数生长期细胞,每孔按4×103个接种至96孔板中,每组设置8个复孔,置于细胞培养箱中培养,待细胞贴壁后转染相应质粒后。继续培养48h后,弃含药培养基,每孔加入新鲜配制的含10uL的毒性检测液CCK8,置于培养箱中继续培养4h后,用酶标仪测波长为450nm的OD值。实验重复3次,取实验结果的平均值作为**终实验结果。按公式计算生长***率=[(对照组OD-实验组OD)/对照组OD]×**,以分组为横坐标,生长***率为纵坐标,绘制细胞生长

切记一定要使用无血清的基础培养基,一是可以排除血清对细胞生长的影响;二是血清的存在会对吸光度的测量产生影响。以上是MTT比色法的介绍,MTT比色法因为涉及到吸出培养基溶解沉淀的操作,所以更适用于贴壁细胞,悬浮细胞比较好选用CCK8检测细胞增殖,下面给大家介绍一下CCK8操作的注意事项。CCK8实验操作CCK8的优势在于对细胞没有毒性,可以直接加入细胞中长时间孵育,而不用考虑试剂本身对细胞带来的影响。向各孔中加入10ul的CCK-8检测溶液。如若检测的细胞增殖或毒性试验,需在此之前加入作用***培养适当时间,例如6h/12h/24h等,然后再加入CCK8检测液。酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰;

经验总结及分享: 

CCK8的说明书大家一定要认真阅读,里面很多细节的问题都有提到。而且说明书里提供的一些关于各种细胞的种板数都很有参考价值,因为那是反复验证过的比较好数值。但无论如何,做这个试验一定要摸条件。你就算再懒,这个懒不得,否则你都只是在做无用功。以下言论全部以细胞毒性试验为前提, 如果你做的是促进细胞生长的***的药效实验那就另当别论了。

摸条件包括1、种板数;2、种板后细胞的贴壁生长时间;3、加药后的孵育时间;4、cck8试剂加入量;5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多,其实这就是一个实验。而且都是种的空白板,也就是不加***,只加细胞和CCK8。 请问合适的种板数是怎么定义的呢?上海cck8测细胞生长曲线

细胞增殖检测——CCK8.江苏cck8吸光度小于0.1但有趋势

cck8试剂加入后孵育时间,随着时间的增加,OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。这里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。

再说一下关于种板设置问题。众所周知周围一圈孔因为边缘效应都是不用来做实验的。一般每组样品我会设置6个复孔,得到的OD值去掉**大值与**小值,其余取平均值。我用的是排***,会省很多力气,但是也会增大组内误差。这个只有通过校正移液***和选用**适***头了。

能力有限,表达不清的大家凑合着看看吧。有疑问的欢迎大家留言讨论,我们的目标是共同进步,哈哈。 江苏cck8吸光度小于0.1但有趋势