3、24小时后，吸出培养基，对照组和空白组每孔各加入100ul无血清培养基，实验组每孔加入100ul基础培养基配制的***，继续作用12或24小时；4、***作用完毕后，每孔加入50ulMTT,继续作用4小时；5、弃掉每孔中的MTT，每孔加入150ul的DMSO或异丙醇。然后震荡10分钟，使孔底的紫色结晶充分溶解；6、在酶联免疫机器上测定吸光度，波长为550nm或490nm。7、细胞存活率=（实验组吸光度值-空白组吸光度值）/(对照组吸光度值-空白组吸光度值)***。这个CCK-8的英文全称是Cell Counting Kit-8.湖北碧云天cck8
在做一些***毒性试验时，比如做铁死亡途径时，我们加入一个***叫C1，这个时候就需要提前换液，其实我们试过，还是会有一些影响。所以这时我们用中性红检测。我们实验室，通常会用20%的硫酸铜溶液放到细胞孵箱下层，预防******。理应说，硫酸铜分子在水溶液中是硫酸根离子和铜离子，是不会挥发的。但是每次只要是新换的硫酸铜溶液再做CCK-8，结果总是不好，我也不知道是什么原因。之前在我们实验室有发生过这样的事情，这种有深有浅的才是该有的结果。我想说的是在有能力选择范围内，尽量选择好一点的试剂，免得浪费时间。江苏cck8统计方法小木虫化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基).
CCK-8盒子的选购还记得***次做CCK-8的实验时研究生二年级的时候，当时用的***个盒子是Sigma的，当时的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，还不是现在的Millipore-Sigma。那个盒子给了我莫大的鼓励，因为在那之前做分子克隆一直都不是很顺利。这个盒子是我的硕士老板从美国带回来的，品质有保证，***的结果也是很好的。后面在做CCK-8的实验时，我们在有选择的情况下都会买sigma，下图2是sigma官网的截图。其实也不贵，只是到货时间太慢。
1、种板数：这个要查文献，看你所用细胞别人有无做过，把范围大致找出。记住还要参考说明书，这个很重要。然后稀释一系列浓度种板。首先你要观察多长时间细胞可贴壁完全，一般贴壁生长24小时。然后还有在你的实验时间内，不同细胞数下孔内生长情况。比如我拟定考察4天的时间，那么在4天内，细胞是刚好铺满还是堆积生长？因为每块板都会设置对照孔，也就是含有细胞的培养基+CCK8，这个数值是板上的比较大数值，CCK8试验比较好OD值在1.0附近，所以这个比较大数值比较好能控制在1.0左右。我的实验经验是不要让细胞长满，一旦长满了很难去判断是否堆积生长了，对***能否顺利进入细胞有影响此为其一，其二生长不均匀易导致孔间OD值数据偏差大，而且OD值也很大。在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5% CO2）.
特点不同1、CellCountingKit-8：灵敏度高，数据可靠，重现性好；操作简便，省时省力；水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞；无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低；适合于高通量***筛选。2、MTT法：特点是灵敏度高、经济。三、应用不同1、CellCountingKit-8：主要用途为***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验。2、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗*****筛选、细胞毒性试验以及**放射敏感性测定等。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比.北京cck8测的是什么
CCK8原理、优势和步骤.湖北碧云天cck8
实验原理：CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。湖北碧云天cck8