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江苏悬浮细胞cck8

来源: 发布时间:2022年01月25日

统一铺好后,待细胞完全沉淀下来后,在显微镜下观察各实验组的细胞密度,如果密度不均匀,则固定一组,微调其他组细胞的量再次铺板(如:发现NC组细胞较多,降低细胞量再次铺板),放入细胞培养箱中培养。4.从铺板后第二天开始,每孔加入10-20μlCCK-8溶液,如果每孔的培养基为100μl,则加入10μlCCK-8溶液,如果每孔的培养基为200μl,则加入20μlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。CCK-8用途:***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验.江苏悬浮细胞cck8

CCK8原理、优势和步骤 检测原理:

◆ Cell Counting Kit简称CCK试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

◆ WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。 上海cck8 dojindo 说明书不同的种板数对检测***的IC50影响大吗?

没有做过MTT实验,但其实原理及目的都是一样的(反应机理不一样)。都说CCK8简单点而且数据更稳定,所以就用了这个试剂盒。CCK8的说明书大家一定要认真阅读,里面很多细节的问题都有提到。而且说明书里提供的一些关于各种细胞的种板数都很有参考价值,因为那是反复验证过的比较好数值。但无论如何,做这个试验一定要摸条件。你就算再懒,这个懒不得,否则你都只是在做无用功。以下言论全部以细胞毒性试验为前提,如果你做的是促进细胞生长的***的药效实验那就另当别论了。

五、实验注意事项:·若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。·如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉***影响。当然***影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。·当使用标准96孔板时,贴壁细胞的**小接种量至少为1,000个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100μl培养基)。细胞毒性测定:这个可以和各个处理因素对细胞活性和增殖的影响,比如低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。

当使用标准96孔板时,贴壁细胞的**小接种量至少为1000 个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2500 个/孔(100μl培养基)。酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰,可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

注意事项CCK8可以检测大肠杆菌,但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染,以免影响结果。CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月,在-20℃下避光可以保存1年。当在培养箱内培养时,培养板**外一圈的孔**容易干燥挥发,由于体积不准确而增加误差。一般情况下,**外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。在培养基中加入CCK8,培养一定的时间,测定450 nm的吸光度即为空白对照。 CCK-8 反复冻融会增加背景值,干扰实验测定。天津cck8细胞增殖实验od值

若细胞培养时间较长,培养基颜色或 pH 发生变化,建议更换培养基后再加 CCK-8.江苏悬浮细胞cck8

CCK8检测细胞增殖和毒性实验佰欧晶生物专注于生命科学、医学及药学科研咨询和技术服务,致力于疾病关键基因功能研究,中药功能及机理研究,纳米靶向***研究,**研究整体方案服务。CellCountingKit-8(简称CCK-8)试剂用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazandye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。江苏悬浮细胞cck8

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