CCK8检测细胞增殖和毒性实验佰欧晶生物专注于生命科学、医学及药学科研咨询和技术服务，致力于疾病关键基因功能研究，中药功能及机理研究，纳米靶向***研究，**研究整体方案服务。CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK8虽好,这些情况下不建议用!江苏cck8凋亡
CCK-8没有具体规定反应时间的长短，以具体反映比较好显色的时间为主。因为不同的细胞反应时间、显色标准都不一样，所以一定要设置预实验。预实验中，可以先做几个孔摸索一下接种数量和培养时间。3、悬浮细胞比贴壁细胞难显色。在加入CCK-8培养后，可每隔一小时观测一下颜色的变化情况，或者之间用酶标仪检测更为准确。4、CCK8作用时间越长，OD值就越大，所以对于作用时间也不是越长久越好，要把OD值控制在1左右。5、CCK8要求检测孔内不能有气泡。江苏cck8 波长用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值.
CCK法的操作步骤（更多内容请见说明书）：实验一：细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
当使用标准96孔板时，贴壁细胞的**小接种量至少为1000 个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500 个/孔(100μl培养基)。酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
注意事项CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。当在培养箱内培养时，培养板**外一圈的孔**容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，**外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。 CCK8试验的总体实验心得.
一直都像个新手，从未老道过。所有新手的迷茫与无奈我**能体会。看到园子里有一些同学在问有关CCK8试验的事情，当初我也和他们一样，像个被蜘蛛丝缠住头的迷茫苍蝇一头扎进园子里，期待能找到些解决谜团的只言片语。希望我写的这些非专业文字能够帮助那些在实验室里没有前行者指点迷津的筒子们。当然仁者见仁智者见智，我写的只是个人实验心得，就供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的，道路是曲折的，时间就是用来浪费的，科研就是自娱自乐使劲折腾。用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。北京cck8 同仁 说明书
细胞增殖与毒性检测实验方法及经验总结-CCK-8 法.江苏cck8凋亡
酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰；◆细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到比较好测定时间。实验二：细胞增殖-毒性检测1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（37℃，5%CO2）。2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。江苏cck8凋亡