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湖北cck8淋巴细胞增殖实验

来源: 发布时间:2022年02月13日

一直都像个新手,从未老道过。所有新手的迷茫与无奈我**能体会。看到园子里有一些同学在问有关CCK8试验的事情,当初我也和他们一样,像个被蜘蛛丝缠住头的迷茫苍蝇一头扎进园子里,期待能找到些解决谜团的只言片语。希望我写的这些非专业文字能够帮助那些在实验室里没有前行者指点迷津的筒子们。当然仁者见仁智者见智,我写的只是个人实验心得,就供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的,道路是曲折的,时间就是用来浪费的,科研就是自娱自乐使劲折腾。接种时注意细胞悬液一定要混匀,以避免细胞沉淀下来,导致每孔中的细胞数量不一致。湖北cck8淋巴细胞增殖实验

实验原理:CellCountingKit-8(简称CCK-8)试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazandye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。上海悬浮细胞cck8请问合适的种板数是怎么定义的呢?

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定,常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现,如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响,基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以,***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。MTT实验操作1、在96孔板中培养细胞,设置对照组(细胞+无血清培养基)、实验组和空白组(无血清培养基),可以采用如下图的排版方式:2、在对照组和实验组中,

贴壁生长的时间我一般就直接让它贴壁长24h了,这个时间细胞已经贴壁完全,而且这样设置时间对自己安排实验时间也方便。没人愿意大半夜爬起来做实验吧。3、加药后的孵育时间,我的实验摸了3个时间,24h,48h,72h。然后根据数据的稳定性(RSD)、OD值的范围(1.0左右)这些来选择比较好的时间。太长了就没有必要了,细胞呆在孔里几天不换液结果可想而知了。4、CCK8试剂加入量,说明书中明确写出建议加入量为培养基体积的10%。这里有一个问题:假设我要孔内是200微升的体系,即细胞悬液+药液+CCK8=200微升呢,还是细胞悬液+药液=200微升,cck8不算在体系内呢。关于这一点文献报道不一致。本人**终采用的是后者。5、cck8试剂加入后孵育时间,随着时间的增加,OD值就会增大。总之原则就是把OD值控制在1.0左右。这里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。各有千秋!CCK8之外的选择除了MTT,还可以是LDH.

CCK8实验操作CCK8的优势在于对细胞没有毒性,可以直接加入细胞中长时间孵育,而不用考虑试剂本身对细胞带来的影响。1、向96孔板中每孔加入细胞100ul,置于培养箱中孵育24小时,96孔板的排版情况和上述MTT相同,在这里不重复介绍了。2、向各孔中加入10ul的CCK-8检测溶液。如若检测的细胞增殖或毒性试验,需在此之前加入作用***培养适当时间,例如6h/12h/24h等,然后再加入CCK8检测液。3、培养箱中孵育1~4小时,比较好反应时间以细胞具体显色程度为准。向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。湖北cck8凋亡

将她培养板在培养箱内孵育1-4小时。湖北cck8淋巴细胞增殖实验

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