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上海cck8增殖数据结果

来源: 发布时间:2022年02月20日

读数前可在摇床上温柔混匀,酶标仪在 450nm 波长处检测每孔的吸光度。

***率(%)= [(对照孔吸光度-实验孔吸光度)/(对照孔吸光度-空白孔吸光度)]×100=IC50

注意事项

CCK8法检测细胞生长情况基于的原理是脱氢酶催化的反应,如果实验处理条件中存在还原剂的影响,应事先去除。如果实验条件中存在还原物质,需单独测定还原物质的空白吸光度。如果还原物质的吸光度很小,可以忽略不计;但如果吸光度很大,则需要去除培养基,再用培养基洗涤细胞3次,然后再加入新的 100ul培养基和10ul CCK-8 溶液进行检测。 该方法已被***用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗*****筛选以及药敏试验等。上海cck8增殖数据结果

细胞增殖实验就是对细胞生长的测定,常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现,如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响,基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以,***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。

MTT实验操作

1、在96孔板中培养细胞,设置对照组(细胞+无血清培养基)、实验组和空白组(无血清培养基),可以采用如下图的排版方式:

2、在对照组和实验组中,每孔加入细胞悬液100ul,培养24小时; 湖北同仁cck8说明书细胞增殖与毒性检测实验方法及经验总结-CCK-8 .

CCK-8盒子的选购还记得***次做CCK-8的实验时研究生二年级的时候,当时用的***个盒子是Sigma的,当时的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich,还不是现在的Millipore-Sigma。那个盒子给了我莫大的鼓励,因为在那之前做分子克隆一直都不是很顺利。这个盒子是我的硕士老板从美国带回来的,品质有保证,***的结果也是很好的。后面在做CCK-8的实验时,我们在有选择的情况下都会买sigma,下图2是sigma官网的截图。其实也不贵,只是到货时间太慢。

摸条件包括1、种板数;2、种板后细胞的贴壁生长时间;3、加药后的孵育时间;4、cck8试剂加入量;5、cck8试剂加入后细胞孵育时间。看起来很多,其实这就是一个实验。而且都是种的空白板,也就是不加药物,只加细胞和CCK8。我没有做过MTT实验,但其实原理及目的都是一样的(反应机理不一样)。都说CCK8简单点而且数据更稳定,所以就用了这个试剂盒。

当然仁者见仁智者见智,我写的只是个人实验心得,但供参考。欢迎大家拍砖共同进步。实验是简单的,道路是曲折的,时间就是用来浪费的,科研就是自娱自乐使劲折腾。


那它的用途也就大致可以猜到,和细胞增殖、细胞毒性相关的实验都可以。

制作标准曲线1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。2.按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。3.接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定O.D值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),O.D值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间)。细胞增殖与毒性检测实验方法及经验总结-CCK-8 法.江苏cck8碧云天

CCK-8用途:***筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、**药敏试验.上海cck8增殖数据结果

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