外泌体膜染料：PKH67、PKH26产品组成：方法一：外泌体直接染色1.适量（10ug，BCA法测量）外泌体溶于500ulDiluentC中（可以用DPBS代替）；2.适量的PKH26（10ug外泌体推荐用量不超过1ul）染料溶于等体积的DiluentC中（可以用DPBS代替），温和吹打混匀；3.将步骤2中的溶液加入1中并迅速吹打混匀。4.避光，室温静置孵育5-10min；5.加入等体积（2ml）的血清（exosomefree），或者1%BSA终止染色反应；6.使用超滤/超离方式洗净未与外泌体结合的PKH26染料。做外泌体检测的公司有哪些？全国专业做外泌体试剂 外泌体(Exosome)是...

南京翌科生物科技有限公司，是一家专注于外泌体与非编码RNA试剂研发、技术服务与临床转化的生物医药****。翌科生物基于团队十余年的研发基础，建立了行业前面的外泌体与非编码RNA研究和转化平台。公司目前拥有范围广丰富的产品线，包括外泌体提取与检测试剂、非编码RNA提取与检测试剂、转染试剂、microRNA表达文库、临床大数据库及涵盖分子、细胞、动物的综合科技服务等100多种试剂和科研外包服务。公司坚持国产试剂自主研发，目前已经拥有发明专利10余项，服务全国各级高校、研究所、医院、第三方检测机构、生物医药公司等数千家客户。外泌体鉴定服务（NTA/WB/电镜）。中国比较好的外泌体提取试剂盒 ...

试剂盒组分：1、样本前处理（1）血清、血浆、细胞培养基等液体样本，开始实验前需经过5000g,离心10min（4℃）去除碎片，取上清；（2）外泌体样本提取后使用PBS溶解，溶解后5000g,离心10分钟（4℃）去除杂质，取上清。2、操作流程：（1）在1.5mLEP管中加入样本上清（血清、血浆、外泌体溶液等）20μL，加入20μLOneStep-A20ul和1μLOneStep-L；（2）涡旋混匀后，水浴锅50℃孵育20min，95℃孵育5min；（3）13000g,15min,4℃离心，取上清；（4）在荧光定量PCR板子的每孔中按下表加入各试剂：代做实验,外泌体检测服务,实验样本检测。南京外泌...

考虑到便于对进液口5智能化地控制进液量，以及对于出液口6智能化地控制出液量，在进液管道11上且近进液口5设有一进液电磁控制阀13，以及在出液管道12上近出液口6设有一出液电磁控制阀15。此处具体来说，可在进液管道11与储存有培养基的储液罐21之间设置一进液控制泵17，以及在出液管道12与用于储存废液的收液罐23之间设置一出液控制泵18。采用实施例1的细胞外泌体优化培养系统对应的具体的细胞外泌体优化培养方法，包括：步骤s1：出液口6关闭，打开进液口5以通过进液口5从进液通道201通入含有细胞的凝胶；步骤s2：待凝胶充满微流通道2且使pdms形变膜8向背离透明玻璃支承板3一侧凸起变形至一定...

外泌体(Exosome)一、外泌体简介外泌体(Exosome)是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200nm，密度在，具有杯状形态、双层膜结构，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中。包括肿瘤细胞在内几乎所有类型的细胞（免疫细胞、神经细胞、干细胞)，都可以产生并释放exosome。Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质rRNA和microRNA，Exosome可通过细胞膜受体直接促进受体细胞，也可运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA，甚至细胞器进入受体细胞，参与细胞间通讯。Exosome在免疫应答、炎症反应、血管生成、凋亡、凝血和废...

均符合国际标准，而且呈相对的正态分布，检测结果可信度高。2d培养组的外泌体直径略大于其他组。（2）请参阅图11所示的对外泌体的鉴定，分别通过wb鉴定对应2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体特征蛋白，具体的，westernblotting结果验证了外泌体内特异性标志蛋白的表达，可见此外泌体内明显表达cd9、cd63、tsg101蛋白。3d培养的外泌体组灰度值高于2d培养组，说明外泌体的蛋白富集度更高。（3）请参阅图12所示的对外泌体的鉴定，tem电镜下对应2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体的结构，具体的：透...

三、外泌体服务内容及服务流程1、服务内容1）外泌体提取服务。超速离心、过滤离心、试剂盒提取等。2）外泌体电镜检测鉴定。大小（30-200nm）、形态也呈现出多样性，有研究分为9个类别依次为：单囊泡、双囊泡、多膜泡、小双层膜泡、椭圆膜泡、小管、大管、不完整的膜泡、不规则膜泡，其中在不同类别的囊泡中可以发现三个附加特征：表面具涂层的膜泡、内含纤维的膜泡、电子致密囊泡。3）纳米颗粒数检测。通过Nanosight可视型纳米颗粒分析仪确定外泌体颗粒数。4）WB鉴定蛋白标志物。蛋白包括CD63，CD81，CD9，HSP70，TSG101等。5）外泌体基因、蛋白检测分析服务·外泌体高通量测序分析·外...

主波矢量q＝2π/100μm(如图2)，shm的长为2500μm，人字形微通道的间隔为300μm，形成通道区域为长为39000μm，宽为22115μm。与传统的平壁微流控芯片相比，人字形结构能诱导各向异性流形成，***产生微涡流破坏血浆中外泌体行进的层流流线，导致它们发生“移位”，以此增加抗体涂层通道中外泌体与抗体相互作用的机会(图3)。实施例2、洗脱液验证将血浆用实施例1设计的微流控芯片进行洗脱，外泌体捕获原理如图4中a所示。洗脱液为ph为～(图4中b)，结果发现低ph的甘氨酸-hcl缓冲液比在80μl/min的流速下能释放出更多的外泌体(30-150nm)，而两个对照组(pbs缓冲...

外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日...

外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为"exosome"。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、"运载物"和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴...

7）请参阅图17所示的对不同环境下培养的细胞的活性鉴定，分别对空白组、2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的cck-8细胞增殖能力检测结果，在加入条件培养基3天后，各组明显大于对照组，在第四天时，3d配合应力刺激的培养组的细胞活性更强，与其他组比较时有统计学差异。（8）请参阅图18和图19所示的对不同环境下培养的细胞分泌的外泌体迁移性鉴定，分别对空白组、2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体迁移实验结果，利用transwell小室测定软骨细胞的迁移能力。其中穿过基质的细胞被染色为紫色，细胞数量可直接反应其侵袭能力。其中3d配合...

平滑通道)***增加到×1010±×109particles/ml(人字形凹槽通道)(p<，图5，b)。根据标准的外泌体分离方法测试了hbexo-chip捕捉胰腺*血浆外泌体的能力。将我们收集到的egfp标记的外泌体掺入健康体检者的血浆中，并分为一式两份，一份用于超速离心提取其中的外泌体，另一份用于微流控芯片提取外泌体。提取外泌体中rna并用qpcr检测**外泌体特异信息egfp，pcr结果表明两种方法得到的egfp拷贝数有明显差异，hbexo-chip捕捉特异性外泌体的能力大约是超速离心的4倍(图5，c)。实施例4、为验证分泌到血液中的**来源的外泌体可能会提供更容易获得和更具代表性...

《ScientificReports》杂志发表了该方法更新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。[1]六是色谱法，这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，应用不范围广。人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体，包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时，外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式：一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合，进而***靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中，外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合，从...

南京翌科生物科技有限公司，是一家专注于外泌体与非编码RNA试剂研发、技术服务与临床转化的生物医药****。翌科生物基于团队十余年的研发基础，建立了行业前面的外泌体与非编码RNA研究和转化平台。公司目前拥有范围广丰富的产品线，包括外泌体提取与检测试剂、非编码RNA提取与检测试剂、转染试剂、microRNA表达文库、临床大数据库及涵盖分子、细胞、动物的综合科技服务等100多种试剂和科研外包服务。公司坚持国产试剂自主研发，目前已经拥有发明专利10余项，服务全国各级高校、研究所、医院、第三方检测机构、生物医药公司等数千家客户。翌科生物专做外泌体检测服务,医学实验,医学模型构建。全自动高效液相色谱外...

主波矢量q＝2π/100μm(如图2)，shm的长为2500μm，人字形微通道的间隔为300μm，形成通道区域为长为39000μm，宽为22115μm。与传统的平壁微流控芯片相比，人字形结构能诱导各向异性流形成，***产生微涡流破坏血浆中外泌体行进的层流流线，导致它们发生“移位”，以此增加抗体涂层通道中外泌体与抗体相互作用的机会(图3)。实施例2、洗脱液验证将血浆用实施例1设计的微流控芯片进行洗脱，外泌体捕获原理如图4中a所示。洗脱液为ph为～(图4中b)，结果发现低ph的甘氨酸-hcl缓冲液比在80μl/min的流速下能释放出更多的外泌体(30-150nm)，而两个对照组(pbs缓冲...

除了RAB蛋白，外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白(包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9))、热休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33(结肠上皮细胞来源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素(不成熟的树突状细胞)。其它一些外泌体中的蛋白包括多种的代谢类的酶(数值DH,烯醇化酶1,醛缩酶1,PKM2,PGK1,PDIA3,GSTP1,DPP4,AHCY,TPL1,抗氧化蛋白,P4HB,L...

平滑通道)***增加到×1010±×109particles/ml(人字形凹槽通道)(p<，图5，b)。根据标准的外泌体分离方法测试了hbexo-chip捕捉胰腺*血浆外泌体的能力。将我们收集到的egfp标记的外泌体掺入健康体检者的血浆中，并分为一式两份，一份用于超速离心提取其中的外泌体，另一份用于微流控芯片提取外泌体。提取外泌体中rna并用qpcr检测**外泌体特异信息egfp，pcr结果表明两种方法得到的egfp拷贝数有明显差异，hbexo-chip捕捉特异性外泌体的能力大约是超速离心的4倍(图5，c)。实施例4、为验证分泌到血液中的**来源的外泌体可能会提供更容易获得和更具代表性...

uc）来纯化。外泌体差速离心回收的金标准需要四到五个连续的离心步骤。这些方法都不可扩展。与永生肿瘤细胞系不同，间充质干细胞（msc）的扩增能力是有限的。外泌体的低产量阻碍了间充质干细胞用于外泌体的大规模生产。与此同时，间充质干细胞生长的微环境也对外泌体的产量和质量有着更直接的关联，这些微环境包括了细胞生长的依附材料、受到的力学刺激、条件培养基的流动性等等。间充质干细胞在不同微环境下分泌的外泌体的生物学质量之间存在差异，因此如何采用更好的培养微环境也是外泌体在临床应用中的重要技术难题。因此，基于上述外泌体的独特优势以及现有技术下细胞培养中分泌的外泌体产量和生物学质量有限的问题，通过在细胞...

南京翌科生物科技有限公司，是一家专注于外泌体与非编码RNA试剂研发、技术服务与临床转化的生物医药****。翌科生物基于团队十余年的研发基础，建立了行业前面的外泌体与非编码RNA研究和转化平台。公司目前拥有范围广丰富的产品线，包括外泌体提取与检测试剂、非编码RNA提取与检测试剂、转染试剂、microRNA表达文库、临床大数据库及涵盖分子、细胞、动物的综合科技服务等100多种试剂和科研外包服务。公司坚持国产试剂自主研发，目前已经拥有发明专利10余项，服务全国各级高校、研究所、医院、第三方检测机构、生物医药公司等数千家客户。翌科生物做外泌体提取吗？中国高效液相色谱外泌体提取试剂 1983年...

外泌体具有由甘油二酸酯、磷脂、甘油磷脂、聚甘油磷脂和高含量的胆固醇和鞘脂组成的脂双层膜，与质膜相比，外泌体膜更具有刚性，使其在外环境中表现出稳定性。其中的一些脂质还具有结构外功能，包括在生物发生过程中的运输、识别和内化。除结构和运输成分外，外泌体还含有生物活性脂质，包括前列腺素、脂肪酸和可产生这些脂质的活性酶，可与靶细胞中的外周G蛋白偶联受体和核受体相互作用。当外泌体在1980年***被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与...

平滑通道)***增加到×1010±×109particles/ml(人字形凹槽通道)(p<，图5，b)。根据标准的外泌体分离方法测试了hbexo-chip捕捉胰腺*血浆外泌体的能力。将我们收集到的egfp标记的外泌体掺入健康体检者的血浆中，并分为一式两份，一份用于超速离心提取其中的外泌体，另一份用于微流控芯片提取外泌体。提取外泌体中rna并用qpcr检测**外泌体特异信息egfp，pcr结果表明两种方法得到的egfp拷贝数有明显差异，hbexo-chip捕捉特异性外泌体的能力大约是超速离心的4倍(图5，c)。实施例4、为验证分泌到血液中的**来源的外泌体可能会提供更容易获得和更具代表性...

且及时带走各种细胞代谢废物，减少细胞代谢废物对于细胞活性的影响。对于细胞培养本身来说，也需要更新培养基，以使得细胞实时处于比较好的生长环境，因此，利用循环更新的培养基来产生对于细胞的应力刺激，相比创造提供额外的应力刺激原动力来说，本实施例在节约成本上有明显的优势。（3）对于本实施例的细胞外泌体优化培养系统中，使用的是循环更新的培养基来对细胞产生应力刺激，相比现有技术中例如公告号为cn公开的基于微流控芯片的加压细胞培养系统和方法中采用的由压力的调控来产生对于细胞的应力刺激，虽然压力可以产生对于细胞的应力刺激，可以用于实验环境下细胞受到应力刺激下的各种性能的检测，但是对于细胞分泌外泌体来说...

考虑到便于对进液口5智能化地控制进液量，以及对于出液口6智能化地控制出液量，在进液管道11上且近进液口5设有一进液电磁控制阀13，以及在出液管道12上近出液口6设有一出液电磁控制阀15。此处具体来说，可在进液管道11与储存有培养基的储液罐21之间设置一进液控制泵17，以及在出液管道12与用于储存废液的收液罐23之间设置一出液控制泵18。采用实施例1的细胞外泌体优化培养系统对应的具体的细胞外泌体优化培养方法，包括：步骤s1：出液口6关闭，打开进液口5以通过进液口5从进液通道201通入含有细胞的凝胶；步骤s2：待凝胶充满微流通道2且使pdms形变膜8向背离透明玻璃支承板3一侧凸起变形至一定...

特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备。但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不利于进一步实验，难以范围广普及。05PS和亲法该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。《ScientificReports》杂志发表了该方法更新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。并且此法获得的外泌体形态完整，生物活性高。06色谱法这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，费用高昂，应用不范围广。第二个指标就是活性，提取过程无疑也是对活性指标息息相关的，同时运输也是，***外泌体为了保持活性，产品的运输以及保存方式都是需要冷链的，这...

以上的具体实施例，对本实用新型的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上只为本实用新型的具体实施例而已，并不用于限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。在本实用新型的描述中，需要理解的是，指示方位或位置关系的术语为基于附图所示的方位或位置关系，只是为了便于描述本实用新型和简化描述，而不是指示或暗示所指的设备或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本实用新型的限制。在本实用新型中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义...

试剂盒组分：1、样本前处理（1）血清、血浆、细胞培养基等液体样本，开始实验前需经过5000g,离心10min（4℃）去除碎片，取上清；（2）外泌体样本提取后使用PBS溶解，溶解后5000g,离心10分钟（4℃）去除杂质，取上清。2、操作流程：（1）在1.5mLEP管中加入样本上清（血清、血浆、外泌体溶液等）20μL，加入20μLOneStep-A20ul和1μLOneStep-L；（2）涡旋混匀后，水浴锅50℃孵育20min，95℃孵育5min；（3）13000g,15min,4℃离心，取上清；（4）在荧光定量PCR板子的每孔中按下表加入各试剂：实验外包、外泌体检测服务、细胞实验外包、分子实验...

且可由紫外光或可见光激发固化反应，形成适于细胞生长与分化且有一定强度的三维结构。其生物相容性远优于基质胶、纤维蛋白胶，而与胶原性能相近。对于本实施例采用的具有光敏基团的凝胶的制备采用如下方式：将10g水凝胶粉末溶解在100ml的dpbs中，置于50°孵箱中，在磁力搅拌下完全溶解后，逐滴加入8ml甲基丙烯酸酐，在孵箱中继续反应3h后，加入400mldpbs稀释，后于透析膜（分子截留量：12-14kda）中进行透析，置于40℃中反应一周，***搜集后冻干备用。步骤s4：打开出液口6，使得若干条微流通道2中未交联凝固的凝胶从出液口6排出；步骤s5：关闭出液口6，打开进液口5，对微流通道2内通...

特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备。但是非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不利于进一步实验，难以范围广普及。05PS和亲法该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。《ScientificReports》杂志发表了该方法更新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。并且此法获得的外泌体形态完整，生物活性高。06色谱法这种方法分离到的外泌体在电镜下大小均一，但是需要特殊的设备，费用高昂，应用不范围广。第二个指标就是活性，提取过程无疑也是对活性指标息息相关的，同时运输也是，***外泌体为了保持活性，产品的运输以及保存方式都是需要冷链的，这...

10）请参阅图21所示的细胞在静力状态下和细胞受到牵张力状态下的电镜对比图，其中，左图为细胞在静力状态下的电镜图，右图为细胞受到牵张力状态下的电镜图。具体的，细胞受到了牵张力的作用而发生变形，变形幅度为30%。综上，通过本实施例的细胞外泌体优化培养方法培养的细胞不仅可以提高细胞的外泌体分泌量，而且分泌的外泌体的生物学质量更强。相比现有技术中的例如对于细胞进行的气压应力刺激的培养方法，本实施例的细胞外泌体优化培养方法拥有以下几点优势：（1）本实施例的细胞外泌体优化培养方法无需额外的应力刺激系统，只靠细胞培养生长的过程必需的培养基的循环供给即可产生循环的应力刺激，即对于本实施例中的培养基既...

即3d配合应力刺激的培养组的产量大于单纯3d培养组的产量，而单纯3d培养组的产量大于2d培养组的产量。（5）请参阅图14所示的对不同环境下培养的细胞分泌的外泌体的质量的鉴定，本鉴定过程采用对于外泌体的蛋白组分进行，分别对应2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体蛋白质组含量图，具体的：2d培养组（浅蓝色）和3d培养组（灰色）以及3d配合应力刺激的培养组（蓝色）中检测到的蛋白维恩图。数字表示每一组中检测到的蛋白数量，蛋白含量用ibaq法测定。图解：三种培养方式中，有380种蛋白存在交集，其外泌体都具有类似的蛋白组成。但是3d+应力刺激组的蛋白种类更多，...