即3d配合应力刺激的培养组的产量大于单纯3d培养组的产量，而单纯3d培养组的产量大于2d培养组的产量。（5）请参阅图14所示的对不同环境下培养的细胞分泌的外泌体的质量的鉴定，本鉴定过程采用对于外泌体的蛋白组分进行，分别对应2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体蛋白质组含量图，具体的：2d培养组（浅蓝色）和3d培养组（灰色）以及3d配合应力刺激的培养组（蓝色）中检测到的蛋白维恩图。数字表示每一组中检测到的蛋白数量，蛋白含量用ibaq法测定。图解：三种培养方式中，有380种蛋白存在交集，其外泌体都具有类似的蛋白组成。但是3d+应力刺激组的蛋白种类更多，且含有87种独有的蛋白种类，由此可知，3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体的质量比较好。（6）请参阅图15和图16所示的对不同环境下培养的细胞的迁移率鉴定，分别对应2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞划痕实验，其中图15为光镜下采集划痕实验后细胞迁移距离的变化图，图16为统计分析细胞迁移率结果。实验证明表明3d配合应力刺激的培养组对促进软骨细胞迁移的能力更强，其次为3d培养组。。赶紧告诉你如何选择一家好的做外泌体的公司 ！！！！全国药物外泌体研发
外泌体（exosomes）是一种能被机体内大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜，直径大约为30-150nm。外泌体***存在并分布于各种体液中，携带和传递重要的信号分子，形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统，影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。外泌体的形成与分泌目前的主流观点认为，外泌体的产生过程为：细胞膜内陷，形成内体（endosome），再形成多泡体（multivesicularbodies，MVB），**后分泌到胞外成为外泌体。外泌体中携带有母细胞的多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息。外泌体**早见于1981年，EGTrams等在体外培养的绵羊红细胞上清液中发现了有膜结构的小囊泡，并命名为exosome。对于外泌体的作用，当时推测为细胞排泄废物的一种方式。1996年GRaposo等发现类似于B淋巴细胞的免疫细胞也会分泌抗原呈递外泌体（antigenpresentingvesicle），所分泌的外泌体可以直接刺激效应CD4+细胞的抗**反应。2007年HValadi等进一步发现细胞之间可以通过外泌体中RNA交换遗传物质。随着有关外泌体研究越来越多，研究者发现它***参与了机体免疫应答、抗原呈递、细胞分化、**生长于侵袭等各种生物过程中。全自动做外泌体研究外泌体提取找哪个公司做？
本发明涉及医学诊断仪器，具体涉及外泌体分离微流控芯片，还涉及利用外泌体分离微流控芯片捕获外泌体的方法。背景技术：外泌体(exosomes)是一种脂质膜包裹的纳米颗粒(30-150nm)，由各种类型的细胞(正常细胞和异常细胞)通过内溶酶体途径分泌到细胞外环境。外泌体内部携带了大量来自亲代细胞的生物信息，例如蛋白质、mirna、mrna等，能反应亲代细胞的代谢状态和病理状态。同时外泌体在循环体液中含量丰富，在血液中的浓度(108-1010颗粒/ml)明显高于循环肿瘤细胞ctcs(1-100细胞/ml)。因此肿瘤细胞来源的外泌体能反应**的状态，是理想的**生物标志物。然而外泌体在临床中并未***使用，**主要的原因是外泌体尺寸小，现有技术难以将其从复杂的体液环境内分离出来。目前外泌体的分离主要依赖于超高速离心法，但是这种方法步骤繁琐，耗时长(>10h)，仪器昂贵，不能将外泌体和其它囊泡或大分子蛋白区分开来。此外市场上常见的外泌体分离试剂盒利用聚合物分离外泌体，但沉淀外泌体的同时会沉淀出大量的杂蛋白，给后续检测结果带来假阳性的结果。微流控芯片的技术进展为外泌体的分离提供了可能性，然而传统的芯片通道多为平滑的s形通道，不利于流体在通道里的混合。
本实用新型涉及生物技术领域，尤其涉及一种细胞外泌体优化培养系统。背景技术：外泌体是微小的膜结合囊泡（直径为40～200nm）,在生理和病理条件下，许多不同类型的细胞将其释放到细胞外。外泌体还有信号蛋白，microrna,mrna,dna和脂质，在转运的时候能够调节受体细胞的各种生命活动。外泌体作为药物载体进行药物运输具有独特的优势，主要体现在：（1）当使用自源外泌体时，外泌体引起的有害免疫反应极低；（2）外泌体在人体血液中的稳定性较好；（3）向细胞转运“货物”的效率很高；（4）外泌体运载药物时具有一定的靶向性；（5）外泌体直径在40～100nm之间，因此可以很好地利用增强渗透滞留（epr），有选择性地渗入到**或者炎症组织部位。外泌体技术作为递送平台的临床前和临床开发需要大量的外泌体。外泌体的分离方法需要易于扩展以支持大规模生产。目前的方法产量低并且不可扩展，这阻碍了外泌体在临床前动物**效评估。通常每只小鼠使用的剂量为109-1011，以实现生物学结果。分离这种外泌体量需要处理一升的条件培养基来处理一只动物。因此，顺利支持动物研究的外泌体生产可能需要数月时间。外泌体通常通过分子大小排阻或亲和层析，或通过密度梯度或差异超速离心。南京实验医学平台一站式外泌体检测服务平台。
也不利于流体中的细胞、蛋白和外泌体与通道中的抗体结合。因此，急需一种特异性分离外泌体的芯片，高通量、体积小和操作简单，为**早期及伴随诊断提供工具。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种外泌体分离微流控芯片；本发明的目的之二在于提供利用所述外泌体分离微流控芯片捕获外泌体的方法。为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：1、外泌体分离微流控芯片，所述芯片包括多个交错人字型微混合器，每个shm的人字形凹槽呈周期性地交错排列。推荐的，所述人字型微混合器每个循环周期由十个人字形的不对称连续区域组成。推荐的，所述交错人字型微混合器组成八个单独的人字形微通道，八个人字形微通道通过集管与入口连接。推荐的，通道的总高度(h)50μm，凹槽的高度与通道的高度(α)的比率设定为；v字形和通道轴的夹角(θ)为45°，主波矢量q＝2π/100μm。2、利用所述外泌体分离微流控芯片捕获外泌体的方法，包括如下步骤：在芯片通道内包被捕获抗体，加入体液样本，用ph为～，收集洗脱液。推荐的，所述洗脱的缓冲液流速为80μl/min。推荐的，所述捕获抗体的浓度为5～20μg/ml。推荐的，所述外泌体胰腺*血浆外泌体，包被抗体为gpc1抗体。南京做外泌体提取找哪个公司做？南京做外泌体试剂
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均符合国际标准，而且呈相对的正态分布，检测结果可信度高。2d培养组的外泌体直径略大于其他组。（2）请参阅图11所示的对外泌体的鉴定，分别通过wb鉴定对应2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体特征蛋白，具体的，westernblotting结果验证了外泌体内特异性标志蛋白的表达，可见此外泌体内明显表达cd9、cd63、tsg101蛋白。3d培养的外泌体组灰度值高于2d培养组，说明外泌体的蛋白富集度更高。（3）请参阅图12所示的对外泌体的鉴定，tem电镜下对应2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体的结构，具体的：透射电镜可见各组外泌体具有明显的膜结构，且呈圆盘形。（4）请参阅图13所示的对不同环境下培养的细胞分泌的外泌体的数量的鉴定，分别对应2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体产量对比，具体的：产量=以nanosighttrackinganalysis计算外泌体数量除以细胞数量。每组重复7次，单因素方差分析差异性。图解：与2d培养相比，3d状态下细胞分泌的外泌体数量更多，如果同时存在力学刺激，其产量比单纯3d培养更多。全国药物外泌体研发
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