轻轻吹3-5次混匀。B.轻轻混匀转染试剂，用50ulOpti-MEM稀释lipofectamineTM2000,轻轻吹3-5次混匀，室温下静置5min。C.混合转染试剂和siRNA稀释液，轻轻吹3-5次混匀，室温下静置20min。D.转染复合物加入到24孔细胞板中，100ul/孔，前后轻摇细胞板混合均匀。E.细胞板置于37℃、5%CO2培养箱中培养18-48h。转染4-6h后可更换新鲜培养基。3）效果检测：转染完成后24-72h均可进行siRNA沉默效果检测，更佳检测时间与细胞类型，转染试剂，检测目的等相关。1）RNA水平的检测：mRNA是检测siRNA沉默效率的更佳指标，siRNA转染后24-72h即可检测到靶基因mRNA表达明显降低，检测方法是RealtimePCR。2）蛋白水平的检测：检测方法是Westernblot。3）功能筛选：应用EdU细胞增殖、EdUTP细胞凋亡等方法进行细胞功能筛选。动物实验修饰方法：由于动物实验对siRNA稳定性的要求较高，尽管未修饰的siRNA也可以进行动物实验，但是以CHol,OMe,PS修饰的siRNA效果较好。给***法：局部给药：更直接的导入方式，siRNA的导入效率高，用量少。siRNA能很快被吸收。适用于浅表***和组织，包括眼，肌肉和皮下组织等。2表2：使用lipofectamineTM2000转染siRNA产品参考用量细胞培养容器表面积。南京翌科生物科技有限公司RNA比较靠谱。连云港miRNA哪家好
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[2]2.核酶特点到目前为止发现的各种核酶有以下特点。[2]（1）核酶的化学本质为RNA或RN**段。有些核糖**白也有催化作用，但活性中心位于其蛋白质成分上，并不属于核酶，例如端粒酶。然而，如果核糖**白的RNA含活性中心，则该RNA组分就是核酶，例如核糖核酸酶P分子中的M1RNA。[2]（2）核酶的底物种类比较少，大多数是自身RNA或其他RNA分子，并因此分为自体催化、异体催化两种类型。此外还有其他底物，例如肽基转移酶的底物是氨酰tRNA和肽酰tRNA。[2]（3）核酶的催化效率比酶低得多。[2]（4）核酶也具有专一性。例如，M1RNA只剪切RNA前体5′端的额外核苷酸，不剪切其3′端的额外核苷酸及其他序列。
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在自然界中.相对的,DNA酶活跃的条件就严格很多.更后,RNA不耐高温.所以提取RNA需要偏酸,低温,RNA酶失活的环境。育儿达人这问题问的专业性好强啊。怎么用通俗的语言讲好为难。首先，要说明什么是RNA。RNA，跟DNA是一对兄弟，是DNA的转录表达器。如同插头与插座的关系，实现遗传信息在蛋白质上的表达，是遗传信息向表型转化过程中的桥梁。RNA由核糖核苷酸经磷酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种，即A腺嘌呤[1]，G鸟嘌呤[2]，C胞嘧啶[3]，U尿嘧啶[4]。其中，U尿嘧啶取代了DNA中的T胸腺嘧啶而成为RNA的特征碱基。降解就是发生了水解反应RNA性质很不稳定，很容易发生降解，而我们空气中/水中还有生物体中含有较多的RNA酶，所以制备RNA非常麻烦，一不小心RNA便会降解，更终从核糖核苷酸完全分解为无机磷酸和核苷。连云港miRNA哪家好