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盐城专业做D-荧光素钾盐保质期

来源: 发布时间:2022年07月17日

    GT-NHSCy3-NHS酯Cy7-NHS酯5-羧基荧光素-NHS酯6-羧基荧光素-NHS酯5(6)-羧基荧光素-NHS酯6-羧基荧光素D荧光素钠盐D-Luciferin,SodiumSaltD-荧光素钾盐D-Luciferin,PotassiumSaltD-荧光素萤火虫,游离酸D-LuciferinFirefly,freeacid萤火虫荧光素酶fireflyluciferase海肾荧光素酶Renillaluciferase天然腔肠荧光素Coelenterazineh腔肠素hCoelenterazinef腔肠素fCoelenterazineh/腔肠素h腔肠荧光素活题成像用D-luciferin,potassiumsalt荧光素钾盐介绍一、活题成像技术简介活题生物发光成像技术能够让研究人员直接快速的测量各种哎症模型中肿大的瘤的生长、转移以及对药物的反应。在药效学评价方面,荧光素酶哎症模型可用于哎症体内用药在整体动物水平上进行长期疗效跟踪观察。利用无创伤活题成像对哎细胞生长的检测,可对哎症治的好之前和过程中的哎细胞的变化进行实时观测和评估。荧光素酶的发光是生物发光,不需要激发光,但需要底物荧光素(D-Luciferin)。荧光素酶的底物荧光素,约280道尔顿。荧光素的水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透细胞膜和血脑屏障。荧光素是腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内的,约一分钟就可以扩散到小鼠全身。荧光素。D-荧光素盐也算是钠盐和钾盐。盐城专业做D-荧光素钾盐保质期

    后者能够易溶于水或缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成溶液后的这三种产品,在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。产品性质运输和保存运输条件:4℃冰袋运输;短期保存:4℃干燥避光长期保存:-20℃干燥避光母液保存:-20℃避光有效期长期保存:有效期一年工作液:先用现配使用方法1.体外生物发光检测1)用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐,配制成30mg/mL的储存液(100-200×),混匀。立即使用,或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。2)用预热好的组织培养基将储存液稀释至mg/mL的工作液浓度。3)去除细胞培养基。4)待图像分析前,向细胞内添加荧光素工作液,37℃孵育5-10min,然后进行图像分析。2.***成像分析1)用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的荧光素的储存液,混匀。2)用µm滤膜过滤除菌。立即使用,或分装于-20℃避光保存,避免反复冻融。3)腹腔注射(.),按照150mg/kg的荧光素/体重浓度进行注射,以小鼠为例,每只小鼠体重假定20g,每只小鼠用量3mg;4)注射入体内10-15min(待光信号达到更强稳定平台期)后进行成像分析。注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定更高信号检测时间和信号平台期。 连云港萤火虫荧光素酶D-荧光素钾盐试剂D-荧光素钾盐荧光素酶和ATP水平分析。

    可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。荧光素酶报告基因有许多优点:①非放射性;②比CAT及其他报告基因速度快;③比CAT灵敏100倍;④荧光素酶在哺乳细胞中的半衰期为3小时,在植物中的半衰期为3.5小时。由于半衰期短,故启动子的改变会即时导致荧光素酶活性的改变,而荧光素酶不会积累。相反,CAT在哺乳细胞中的半衰期为50小时。荧光素酶浓度在10—16mol/L(10pS/L)到10-8mol/L(1mg/L)范围内,荧光信号强度与酶浓度成正比。在理想条件下,可检测到l0-20mol/L的荧光素酶。检测步骤:1.用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。2.设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中。3.筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。4.扩增转录因子质粒,提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照,提纯备用。5.培养293(或其它目的细胞),并接种于24孔板中,生长10-24小时(80%汇合度)。6.将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。7.提取蛋白并用于荧光素酶检测。8.加入底物,测定荧光素酶的活性。9.计算相对荧光强度,并与空载对照比较。

    luciferyladenylate)+PPi萤光素化腺苷酸+O2→氧荧光素+AMP+光这一反应非常节省能量,几乎所有输入反应的能量都被转化为光。与之形成鲜明对比的是人类使用的白炽灯,只有越10%的能量被转化为光,剩余的能量都变为热能而被浪费。分析荧光素或荧光素酶不是特定的分子,而是对于所有能够产生荧光的底物和其对应的酶的统称,虽然它们各不相同。不同的能够控制发光的生物体用不同的荧光素酶来催化不同的发光反应。更为人所知的发光生物是萤火虫,而其所采用不同的荧光素酶与其他发光生物如荧光菇(发光类脐菇,Omphalotusoleariu')或许多海洋生物都不相同。在萤火虫中,发光反应所需的氧气是从被称为腹部气管(abdominaltrachea)的管道中输入。一些生物,如叩头虫,含有多种不同的荧光素酶,能够催化同一荧光素底物,而发出不同颜色的荧光。萤火虫有2000多种,而叩甲总科(包括萤火虫、叩头虫和相关昆虫)则有更多,因此它们的荧光素酶对于分子系统学研究很有用。目前研究得更透彻的荧光素酶是来自Photinini族萤火虫中的北美萤火虫(Photinuspyrali')。应用荧光素酶可以在实验室中用基因工程的方法生成,并被用于多种不同的实验。D-荧光素钾盐检测是个人合作吗?

    每孔加入100μl养24h后,Luciferin使其终浓度为150μg/ml,PBS,再加入D-立即用活题成像系统检测,分析发光强度与细胞数之间的相关性。4)细胞生长曲线绘制MCF7-luc细胞和作为对照取表达荧光素酶的MCF-7细胞,接种于24孔板,接种密度为2×104/孔。细胞接种后1~7d,每天胰蛋白酶消化其中3孔细胞,用细胞计数仪测定细胞数。以细胞生长天数为横坐标,细胞数目为纵坐标,分别绘制两种细胞生长曲线。二.动物模型BLAB/c裸鼠皮下移植瘤模型的建立BLAB/cnu/nu裸鼠,4~5周龄,体重(15±2)g,雌雄各3只。取对数生长期的MCF-7用PBS重悬为2.5×10/ml悬液,每只裸鼠左右背侧近腋部皮下接种100μl,共接种6只。接种后第5d采用德国BERTHOLD公司的活题成像系统检测信号强度。以后每5d观测一连续观测30d。观测前每只裸鼠戊巴比妥钠麻醉(计量为:35mg/kg体重),按150mg/kg体重的量腹腔注射luciferin(invivograde),10min后,进行活题成像观察皮下肿大的瘤的生长情况,定量分析各时间点的荧光值。绘制肿大的瘤皮下生长曲线.MCF-7-luc细胞裸鼠皮下移植瘤的病理形态学观察MCF-7-luc细胞裸鼠皮下接种后25d,脱颈处死小鼠,取肿大的瘤组织,制成石蜡切片,切片厚度为3μm。D-荧光素钾盐的合作平台有哪些?常州体外研究D-荧光素钾盐使用说明

D-荧光素也常用于身体的外部研究。盐城专业做D-荧光素钾盐保质期

    荧光素也就是FDAFDA可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。由于荧光素较BCECF或Calcein的亲水性低,因此荧光素从细胞中渗漏的量也高。FDA也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别为488nm和530nm。荧光素酶(英文名称:Luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的统称,其中更有代表性的是一种学名为Photinuspyralis的萤火虫体内的荧光素酶。在相应化学反应中,荧光的产生是来自于萤光素的氧化,有些情况下反应体系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。没有荧光素酶的情况下,萤光素与氧气反应的速率非常慢,而钙离子的存在常常可以进一步加速反应(与肌肉收缩的情况相似)。[1]荧光生成反应通常分为以下两步:萤光素+ATP→萤光素化腺苷酸(luciferyladenylate)+PPi萤光素化腺苷酸+O2→氧荧光素+AMP+光这一反应非常节省能量,几乎所有输入反应的能量都被转化为光。与之形成鲜明对比的是人类使用的白炽灯,只有越10%的能量被转化为光,剩余的能量都变为热能而被浪费。荧光素或荧光素酶不是特定的分子,而是对于所有能够产生荧光的底物和其对应的酶的统称,虽然它们各不相同。不同的能够控制发光的生物体用不同的荧光素酶来催化不同的发光反应。盐城专业做D-荧光素钾盐保质期