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德国臻准数字PCR性能特点

来源: 发布时间:2022年12月05日

使用ddPCR的一个主要优点在于,定量不是相对的。微滴式数字PCR计算事件的数量,因此可以确定检测极限和比较低起始量,以便达到所需的灵敏度。在连续监控或比较不同患者的效果时,这可以更准确地比较负荷,因为所测得的丰度不是相对的。经过实验证实,ddPCRKRASG12/G13ScreeningKit也能够检测患者cfDNA样品中的KRAS突变(图2)。这些患者的血浆样品购自ConversantBio和ProMedDx,之前已通过FFPE基因分型被分为KRAS突变阳性或阴性。欢迎咨询广州双螺旋科学仪器有限公司。检测结果部分为阳性,部分为阴性,之后进行分子数统计,不需做标曲。德国臻准数字PCR性能特点

引物设计(DesignPrimers):引物长度(PrimerLength):18-25个碱基之间。短的引物更易于同靶序列结合,但过短的引物也更可能同基因组上的多个区域相结合而产生非特异性扩增产物。更长的引物会提高同靶序列结合的特异性,但过长的引物(>30bp)同靶序列结合速度变慢,降低结合率。引物长度和组成直接影响引物Tm值(PrimerMeltingTemperature)和退火温度(AnnealingTemperatures)。引物的组成——GC%含量(GCContent):指引物总碱基中G和C碱基数量的百分比,该值应在40-60%之间。如果模板序列的GC含量较高,推荐使用较高Tm值的引物。深圳臻准数字PCR品牌数字PCR是定量技术,基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量,是一种定量的方法。

dPCR的结果统计方式有2种,一种是采用标记多种颜色,通过不同检测通道分辨不同颜色和强度,再根据分散液滴的数量计算待测基因的含量;另一种采用概率统计的数据处理方法,即通过泊松分布的方法对结果进行分析。应用概率统计分析数据和对数据处理方法的模型直接关系着结果的准确性和分析时间的长短。常用的统计方法是假设每个微反应单元的体积相同,根据泊松统计计算拷贝数,公式为:M=-Vx1n(1-x/)其中M是目标总拷贝数量;V是微反应单元数量;x是发光的微反应单元数量。

企业宗旨:成为数字PCR的,更好地服务于体外诊断行业,让检测更简单!企业价值观:用户,质量为本;潜力而为,主动开拓;高效执行,负责到底。发展历程:2016年,企业成立2017年,数字PCR系统研制成功2018年,产品线成熟2019年,生产线建成“让检测,更简单”。臻准生物诚挚邀请您莅临展会现场,洽谈合作、共赢未来!作为华南地区备受举荐的专业平台,BTE始终以昂首积极的姿态迎接数万专业人士,携手生物技术行业从业者共同探讨行业发展新机遇。多年来,BTE始终时刻探索业界风向,吸纳行业前沿资源,不忘宗旨,锐意开拓,正围绕粤港澳大湾区生物行业产业群的协同发展交流与融合打造一个高水平科技创新载体和平台。目前dPCR中体积优化方法以光学显微镜观测为主。

在定量PCR时,我们常常纠结一个问题,究竟是相对定量还是***定量呢?如今,你无需纠结了,因为数字PCR(digitalPCR)来了。尽管这两种技术有些类似,都是估计起始样品中的核酸量,但它们有一个重要的区别。定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量,而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的***定量。因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究(如等位基因不平衡表达)、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。通过“仪器+试剂”相互配合的方式,打出了数字PCR检测的“组合拳”。广州国产数字PCR系统

分散方式与数量由数字PCR系统决定,分散体积和结果表达方式需要实验人员在实验过程中优化得到。德国臻准数字PCR性能特点

dPCR在使用过程中需要特别注意体积误差造成的结果偏差。体积误差对于测量拷贝数浓度会产生偏差。目前dPCR中体积优化方法以光学显微镜观测为主。分散体积的差异会增加拷贝数结果的不确定性,Emslie等使用光学显微镜纵向拍照比较图片边缘的微小差异,考察了数字PCR系统中每个微孔内和孔与孔间的体积差异对实验结果的影响程度。Corbisier等使用微滴数字PCR对6种不同质量分数棉籽粉质粒DNA标准物质[ERM-AD623a-f,浓度范围(10~10)copies/ul]进行分析,优化了液滴体积得到相应校正因子,并使用该校正因子发现并校准了运行软件中液滴体积不变的假设而引起的数据偏离,数据结果的一致性有明显提高。德国臻准数字PCR性能特点

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