磷酸盐缓冲液（pH7.4）

具体的检测试剂盒规矩说明操作方法：要确保微量加样器的准确性，能够运用蒸馏水和电子天平进行确认(因为蒸馏水不含杂质，温度环境为20%左右时，lmL的水能够看作是lg、200L的水能够看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其高量程和低量程进行确认。在运用微量加样器时，汲取不同瓶子中液体后要更换头，即便汲取规范品溶液。汲取液体时速度不易太快，以免发生气泡，汲取的量不够准确。将液体加到酶标孔中时，避免头和孔内液体触摸，可使头上的液滴和孑L壁触摸，液滴会自然流下去。吸入液体时的的方法是吸两档打一档，避免因为头的毛细作用使得部分液体不能流出而形成的差错。液体试剂的取用方法试剂瓶取用试剂，用左手持量筒（或试管），并用大姆指指示所需体积刻度处。磷酸盐缓冲液（pH7.4）

液体固体试剂正确取用试剂的方法过程：液体试剂的取用方法试剂瓶取用试剂，用左手持量筒（或试管），并用大姆指指示所需体积刻度处。右手持试剂瓶（注意：试剂标签应向手心避免试剂沾污标签），慢慢将液体注入量筒到所指刻度。读取刻度时，视线应与液体凹面的低处保持水平倒完后，应将试剂瓶口在容器壁上靠一下，再将瓶子竖直医学|教育网搜集整理，以免试剂流至瓶的外壁。如果是平顶塞子，取出后应倒置桌上，如瓶塞顶不是扁平的，可用食指和中指（或中指和无名指）将瓶塞夹住（或放在洁净的表面皿上），切不可将它横置桌上。Tris-EDTA缓冲液(100×TE,pH7.0-9.0)BMC原代分离步骤：取淋巴细胞分离液5mL于15mL灭菌离心管中待用。

说明​检测试剂盒的具体规则:汲取液体时要选用量程和需要量挨近的微量加样器吸，削减误差。液体全部参加酶标孔后，将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s，使液体充沛混合均匀，也使其得到充沛的反响。孵育时要使盖板膜封好酶标板，避免水分蒸发，以防曲线不成线性。实验前的30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出，检测试剂盒使试剂盒中的所有试剂与提取好的样品溶液的温度相同，酶标板只需取出所需量。因为底物显色剂对光及其灵敏，因而要避光保存。手艺洗板时每次参加洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中，避免穿插污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。

配制ph计的3mol/L的KCL溶液 ph计的ph电极在使用前都是被护套里的保护液保护着，是为了保持其原有的ph电势平衡不变，为了测量时会更加精确。这里面就是PH电极的保护液，即 3mol/L的KCL溶液。所以要自己学会如何配置，使ph电极浸泡在保护液里，这样就能快速回复其活性，又能很好的测量了。配制ph计保护液——3mol/L的KCL溶液步骤： 1、计算：KCL摩尔质量74.5g/moL, 则KCL质量＝3mol×74.5g/mol=223.5g； 2、 称量：用分析天平称量KCL=223.5g，注意分析天平的使用； 3、 溶解：在烧杯中用100ml蒸馏水使之完全溶解，并用玻璃棒搅拌； 4、 转移，洗涤：把溶解好的溶液移入1000ml容量瓶，用容量瓶瓶口较细的。检测试剂盒可在板孔中参加稀释液，再在其中参加血清标本。

杀灭曲线的建立：通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线），确定能够杀死未转染宿主细胞的较低浓度，从而筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株。建立杀灭曲线至少选择5个浓度。1、按照20-25%的细胞密度将未转化的细胞铺在合适的培养板上，37℃，CO2过夜培养（需要更高密度，可增加接种量）。2、根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。3、第2天换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基，每个浓度做三个平行孔。4、接下来每3-4天更换新的含药物培养基。5、按照每2天进行活细胞计数，来确定杀灭未转染细胞的恰当浓度。通常7-10天内能够杀死绝大多数细胞的较低浓度为筛选用的工作浓度。检测试剂盒如为有菌操作，则主张冰冻保存。柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液(10mmol/L,pH6.0)

一切试剂瓶盖须盖紧以避免蒸腾和污染，试剂避免受到微生物的污染。磷酸盐缓冲液（pH7.4）

淋巴细胞分离液：淋巴细胞分离液是一种根据细胞密度差异，借助离心产生的重力加速度，进行细胞的分离纯化的常用试剂。常用的淋巴细胞分离液有Ficoll淋巴细胞分离液、Percoll淋巴细胞分离液。Ficoll与Percoll分离单个核细胞的方法均为密度梯度离心法。分离原理：外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同，淋巴细胞分离液是一种密度介于1.075~1.090之间而近似于等渗的溶液,用它做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。淋巴细胞分离液Lymphocyte Separation Medium（human, Ficoll-Paque ）是世界范围内用于体外研究分离人淋巴细胞的实验室公认的标准。磷酸盐缓冲液（pH7.4）