斐林试剂(GB/T 5009.7-2016)

检测检测试剂盒操作步骤:标准品的稀释：本检测试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。液体培养基接种向肉膏蛋白胨液体培养基中接种少量菌体时，其操作步骤基本与斜面接种时相同。斐林试剂(GB/T 5009.7-2016)

单个核细胞分离步骤：Ficoll试剂混匀：首先将Ficoll试剂瓶颠倒多次混匀，使用注射器法吸取Ficoll分离液（去掉聚丙烯盖，插入注射器针头）或吸管法吸取Ficoll分离液（去掉聚丙烯盖，拉起铝环，拉开金属密封，移除银环。拿掉橡胶密封，无菌操作吸取需要的Ficoll分离液）。1.离心管加入3mLFicoll分离液。2.稀释过的血液样本小心铺到Ficoll分离液上面。注：缓慢加入样本，小心不要和Ficoll分离液混合，勿搅动。1.室温条件，水平转子离心400g，离心30-40min，可见细胞分层。2.用无菌吸管吸掉上层血浆和血小板，不要碰到单个核细胞层。3.无菌吸管转移单个核细胞层到无菌离心管。DMEM(Low)丁胺卡那霉素给药说明：5%葡萄糖注射液或其他灭菌稀释液100—200ml。

从滴瓶中取用少量试剂。瓶上装有滴管的试剂瓶称作滴瓶。滴管上部装有橡皮头，下部为细长的管子。使用时，提起滴管，使管口离开液面，用手指紧捏滴管上部的橡皮头，以赶出滴管中的空气，然后把滴管，伸入试剂瓶中，放开手指，吸入试剂。再提起滴管将试剂滴入试管或烧杯中。将试剂滴入试管中时，可用无名指和中指夹住滴管，将它悬空地放在靠近试管口的上方，然后用大姆指和食指掐捏橡皮头，使试剂滴入试管中。禁止将滴管伸入试管中。否则，滴管的管端将很容易碰到试管壁上面沾附了其他溶液。以致使试剂被污染。

PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称，不只伪狂犬病毒要用它稀释，一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;生理盐水不具有调整pH的作用，对完整的、具有活性的物质不能保证其在适条件下参与生物反应，所以使用PBS是。PBS也不是的，有的生物活性物质需要的条件比PBS还要高，就需要在平衡缓冲液中加入更多的成分，维持的条件保证生物活性物质保持其完整的特性。校准液标示值往往是按其基质偏差修正的，所以标示值并非实际值。

淋巴细胞分离液：淋巴细胞分离液是一种根据细胞密度差异，借助离心产生的重力加速度，进行细胞的分离纯化的常用试剂。常用的淋巴细胞分离液有Ficoll淋巴细胞分离液、Percoll淋巴细胞分离液。Ficoll与Percoll分离单个核细胞的方法均为密度梯度离心法。分离原理：外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同，淋巴细胞分离液是一种密度介于1.075~1.090之间而近似于等渗的溶液,用它做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。淋巴细胞分离液Lymphocyte Separation Medium（human, Ficoll-Paque ）是世界范围内用于体外研究分离人淋巴细胞的实验室公认的标准。普遍使用液体试剂的基本原理，因此液体试剂在药剂学上的应用具有普遍意义。藻类保色液Ⅰ

当加入一定量强碱时，溶液中存在的弱酸HA消耗OH-离子而阻碍pH的变化。斐林试剂(GB/T 5009.7-2016)

筛选：筛选之前:由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的适合筛选浓度。具体如下：将细胞稀释到1000个细胞/mL，在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选，选择出在10~14天内使细胞全部死亡的低G418浓度来进行下一步的筛选试验。由于每种细胞对G418的敏感性不同，一般变动在100ug/ml～1000ug/ml范围。而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定细胞对这一批G418的适合筛选浓度。尽管如此，特性明确的细胞系G418的适合用量还是稳定的。《分子克隆》给出了几个常用细胞系所需G418的适合用量。斐林试剂(GB/T 5009.7-2016)