LUMINEX常见问题及解答（一） 1) LUMINEX应用于哪些领域? 生物医学研究，生物标记物开发，临床检测等领域。Luminex技术主要用于蛋白和核酸检测分析。 2) LUMINEX敏感性如何？ 灵敏度取决于开头的质量。对于同样的抗体对，Luminex检测的灵敏度高于ELISA技术。一般检测灵敏度在pg级。 3) 对不同类型的样品制备和样品量的要求是怎样的？ 血清、血浆是常用的样本，每次检测需要10ul， 每次可以检测多个蛋白。 从各种细胞或组织中提取的蛋白也可以用Luminex技术检测，制备方法与ELISA、Western Blot完全一样。 4) 一般可以检测到多少基因或蛋白的表达信息？ 检测蛋白和基因的数目主要取决于试剂盒。 蛋白质检测目前可以达到50个左右，基因检测可达500个。 5) 如何保证检测结果的特异性？ 检测的特异性取决于抗体高特异性。 试剂几乎全部来源于美国大公司，产品经过了严格的质量控制。同时，我们检测公司也有近15年的经验、严格的操作程序和质量控制体系。 LabEx提供酶联免疫吸附实验(ELISA)检测服务！内皮生长因子
液态流式技术(Luminex) 流式荧光,又称悬浮阵列、液相芯片等，是近20多年逐渐发展起来的多指标联合诊断技术。该技术以荧光编码微球为中心,集流式 原理、激光分析、高速数字信号处理等多种技术于一体，多指标并行分析，可一管同时准确定量检测2-100种不同的生物分子; 具有高通量、高灵敏度、并行检测等特点；可用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体、配体识别分析等多方面、多领域的研究。 基本原理： 应用微球和流式细胞仪的原理，微球内部含有三种免疫荧光，通过荧光不同的比例可以区分100种不同的微球。每种微球可以用 来检测一种不同的蛋白或基因。因此，利用微球技术，可以同时检测高达100个蛋白或基因。 Luminex技术的测量结果在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平。Luminex应用的荧光编码微球带有针对 不同目标分子的特异性抗体，不同的微球在一定程度上可以自由组合，这样在一次实验中可以同时完成多个目标分子的分析。多 目标分子的同时测定可以减少生物样品的消耗量,节省成本和测定时间，并且使多种目标分子之间相关性的分析更加准确。NAGLULabEx提供 Luminex——xMAP技术—微球。
多重荧光免疫组化，主要的技术原理来自TSA技术，TSA即酪酰胺信号放大技术(Tyramide signal amplification)，是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。该技术可与高性能染料Alexa Fluor、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。 简单来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧光素。荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。 然后微波处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素还留存在样品上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，然后去检测结果。
基于流式平台CBA： CBA（Cytometric Bead Array），即微量样本多指标流式蛋白定量技术是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。 CBA的原理 通过利用一系列带有荧光标记的微小、分散的微球连接特定的捕获抗体以捕捉溶液系统中的待测物，通过对应各种不同检测物的特异微球上所带有荧光强度不同从而同时测定分析样本中多种可溶性成分的数量。 CBA的特点： 1. 能够同时对单个样本进行多种检测。 2. 较传统检测节省样本量9倍。 3. 灵敏度高、重复性好。 4. 所有分析只需一组标准曲线。 5. 避免酶联反应所致人工假象。 6. 节省操作和检测时间。 细胞因子的检测常常被用作各项疾病中预测免疫反应强度的生物标志物。
问：因子检测技术有哪些？ 答: Array抗体芯片、CBA、luminex、MSD。 问：多因子实验适用的样本类型有哪些？ 答: Serum（血清）、Plasma（血浆）、Cell/ Tissue lysate（细胞/组织裂解液）、Cerebrospinal Fluid（脑脊液）、支气管肺泡灌洗液、鼻腔灌洗液、腹腔液等等。 问：如何计算96孔板可做多少样本？ 答: 标曲16孔，预实验8孔，剩余72孔，单孔可做72样本，复孔可做36样本； 问：多因子实验的正式实验，是否可以分批次检测？ 答: 可以，但是有如下要注意： （1）CBA：试剂盒须在一个月内用完，否则标准曲线要重做，重做就要用到试剂，那样本就样减少。 （2）Luminex：每次都必须要做标准曲线，会浪费试剂和孔板，同时试剂也要在一个月内用完，防止试剂过期。 （3）MSD：每次都必须要做标准曲线，会浪费试剂和孔板，同时试剂在一个月内用完，防止试剂过期，每次送样+标准曲线的数量，建议是4的倍数，否则会造成浪费。 LabEx 免疫组化服务：包括DAB染色、HE染色、Masson染色、免疫荧光（IF）。单因子实验
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LabEx多因子检测技术－－液相悬浮技术 经典炎症十因子、高通量细胞因子初筛 液相悬浮芯片：高度特异的捕获单克隆抗体偶联到不同荧光标记的磁珠上，将不同种类磁珠混合后悬浮于 96 孔微孔板中。进一步加 入生物素标记的高亲和配对二抗结合 SA-PE 进行信号放大，以实现对多种微量细胞因子的有效检测。利用梯度稀释的标准品检测信 号构建标准曲线，实现大量目标样本中多因子的同时检测和准确定量。 特点 1、既能检测蛋白，又能检测核酸 2、既能用于临床，又能用于多学科科研领域 3、真正意义的“高通量”检测，一次检测100个指标 4、在准确度、精确度、灵敏度方面与ELISA均可达到相似的水平 内皮生长因子
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