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每隔2天用电阻仪测量细胞跨膜电阻值，直到达到平台，提示细胞已经形成致密单层；或者通过检测荧光染料荧光黄的通过率，以判断细胞刚好完全汇合。电阻仪测量因不伤害细胞，可以继续培养而比荧光黄法更为普遍地被采用。细胞单层汇合后，用DPBS清洗一次细胞，加入含有不同浓度药物（一般10-200μM）的缓冲液。如果要测药物从上至下的运输效果，则上层小室中加药物，下层培养板孔里只加缓冲液；反之则相反。将培养板在37℃条件下培养（60rpm震荡或者不震荡）1-2h，到达时间之后，分别从细胞小室和培养孔里取出一定 体积缓冲液（一般50μL ）转移至新的转运分析板进行LC/MC分析。对于放射性标记药物，分别取出20μL缓冲液加入100μL闪烁液，通过多孔闪烁读板仪读值。

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当用于贴壁细胞培养时，膜上需涂铺胞外基质 MF-Millipore™膜（混合纤维素酯类）* 用于特殊解剖和功能极化不含Triton的混合纤维素酯膜能用于细胞表面受体、体外毒理学、微生物吸附和极化吸收分析。与塑料培养皿相比，细胞在此膜上生长密度可提高 2到3倍，而且具有良好的细胞形态 Isopore™膜（聚碳酸酯广用于贴壁细胞的生长，无需胞外基质 经组织培养处理的亲水性聚碳酸酯膜允许贴壁细胞在无胞外基质（ECM）的条件下生长。尤其推荐用于转运/渗透性研究。可提供5种不同大小孔径的插入式细胞培养小室上海益启生物培养基订购方便。嘉定区细胞转染细胞培养代理商

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本实验技术要点： **细胞比较好经过饥饿处理，并且小室上下培养基的FBS有浓度差，以保证细胞可以穿透基质胶。铺细胞要均匀，滤膜底部不能产生气泡，否则会导致细胞染色不均匀，或者局部细胞无法穿透。根据细胞类型选择合适的膜孔径和膜类型。PET膜兼容***，适合绝大多数种类的细胞。侵袭实验的细胞密度比较大，一般在1 0 6cells/cm2左右，不同**细胞的接种密度、培养时间不同，需要参考文献和实验摸索。细胞太少，迁移不过去；细胞太多，可能导致正常组和实验组无差异。松江区细胞培养细胞培养订购