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深圳数字PCR系统

来源: 发布时间:2023年01月15日

在使用dPCR进行转基因检测时,通常直接参照qPCR的方法。使用不同技术对相同样品检测时,两种方法的灵敏度是否具有可比性成为关注的问题。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765(12板,每板765个微单元)芯片数字PCR分析仪测定标准物质ERM-AD413检测转基因玉米MON810。该小组应用dPCR技术评估在qPCR定义下的灵敏度数值,在拷贝数200-700之间,dPCR与qPCR的测量结果具有一致性。但与qPCR的灵敏度相比,dPCR在低于拷贝数200时有被低估的风险,在高于拷贝数1000时有被高估的风险。dPCR在同一阵列上同时测量转基因和内源性靶点时,需要稀释内源性靶点和转基因靶点在合理拷贝数范围内以保证dPCR测量结果的准确性。数字以灵敏度和准确度测量突变的变异程度、检测稀有的DNA靶拷贝以及解析拷贝数变
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dPCR的结果统计方式有2种,一种是采用标记多种颜色,通过不同检测通道分辨不同颜色和强度,再根据分散液滴的数量计算待测基因的含量;另一种采用概率统计的数据处理方法,即通过泊松分布的方法对结果进行分析。应用概率统计分析数据和对数据处理方法的模型直接关系着结果的准确性和分析时间的长短。常用的统计方法是假设每个微反应单元的体积相同,根据泊松统计计算拷贝数,公式为:M=-Vx1n(1-x/)其中M是目标总拷贝数量;V是微反应单元数量;x是发光的微反应单元数量。苏州医疗系统认证数字PCR技术数字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一种核酸分子定量技术。

20世纪末,Vogelstein等提出数字PCR(digitalPCR,dPCR)的概念,通过将一个样本分成几十到几万份,分配到不同的反应单元,每个单元至少包含一个拷贝的目标分子(DNA模板),在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增,扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析。PCR实际上是一个在模板DNA、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下,DNA聚合酶依赖的酶促合成反应,扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。

PCR常使用目标序列的拷贝数或某一给定样品中转基因的百分比来体现方法灵敏度。由于qPCR和dPCR实验过程所用试剂的兼容性较好,在使用dPCR进行转基因检测时,通常直接参照qPCR的方法。使用不同技术对相同样品检测时,两种方法的灵敏度是否具有可比性成为关注的问题。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765(12板,每板765个微单元)芯片数字PCR分析仪测定标准物质ERM-AD413检测转基因玉米MON810。该小组应用dPCR技术评估在qPCR定义下的灵敏度数值,在拷贝数200-700之间,dPCR与qPCR的测量结果具有一致性。但与qPCR的灵敏度相比,dPCR在低于拷贝数200时有被低估的风险,在高于拷贝数1000时有被高估的风险。dPCR在同一阵列上同时测量转基因和内源性靶点时,需要稀释内源性靶点和转基因靶点在合理拷贝数范围内以保证dPCR测量结果的准确性。全自动数字PCR平台,让数字PCR真正迈入新时代,助推数字PCR普及应用。

在精细诊疗领域,患者外周血中的循环DNA(ctDNA),在的早期筛查,围术期监测,药物疗效评估,预后等方面具有重要的临床应用价值。在肺液体活检领域,EGFR突变由于其在东亚人群中的高突变率,实现精细检测显得尤为重要。研究表明,相较于荧光定量PCR,数字PCR对于血液ctDNA的检测灵敏度更高(0.01%),EGFR突变的阳性检出率也更高。在患者术后复发检测中,数字PCR评估出的ctDNA阳性,可以早于影像学数月提前揭示出患者复发。因此,该项技术在肺精细诊疗中具有重要的作用。我国数字PCR市场的整体规模、公司影响力、行业话语权等也将迎来进一步提升,从而助推行业高质量创新发展。美国医疗系统认证数字PCR技术

数字PCR是通过将一个样本分成几十到几万份,分配到不同的反应单元,每个单元至少包含一个拷贝的目标分子 。深圳数字PCR系统

二项式分布是一个离散概率分布,它给出了m次试验中k次成功的可能性,每次试验的概率为p,例如当掷骰子时,二项分布给出了在10次试验中恰好有7次掷出4的概率。在数字PCR的情况中,投掷骰子类似于将一个目标实体随机“投掷”到一组分区中,当目标落在选定的分区中时,就是成功。如果有n个分区,并且分区过程是完全随机的,则目标出现在所选分区中的概率为1/n。该试验重复m次,样品中的每个分子一次。更多关于PCR的相关信息,欢迎咨询广州双螺旋科学仪器有限公司。深圳数字PCR系统

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