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医疗系统认证数字PCR技术

来源: 发布时间:2022年11月27日

数字PCR技术是继一代普通PCR、二代荧光定量PCR之后的第三代PCR技术。该技术将一个样本分成几到几十万份,分配到不同的反应单元,每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子(DNA模板),在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增;扩增结束后,将有荧光信号的微滴判读为1,没有荧光信号的微滴判读为0,终根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例,计算出待检靶分子的浓度或拷贝数。定量:不再依赖于Ct值和标准曲线,直接给出靶序列的起始浓度,实现真正意义上的定量。更高灵敏度与特异性:数字PCR可实现万分之一稀有样本的定量,可用于极微量核酸样本检测、复杂背景下的稀有突变检测、表达量微小差异鉴定、单细胞基因表达等方面。数字PCR在分子诊断领域将会发挥巨大的作用,数字PCR适用于生物标志物研究、拷贝数变异分析、微生物检测、转基因生物检测、mRNA和miRNA检测、基因相对表达研究等,并对遗传病、、产前诊断的研究提供了一种全新的技术思路与手段,具有广的、不可替代的应用前景。数字PCR作为研发阶段的验证方案之一。医疗系统认证数字PCR技术

naica®六通道微滴芯片数字PCR系统,源于crystal微滴芯片数字PCR技术,自动化微滴生成和扩增,每个样本孔可实现6荧光通道的检测,智能化识别微滴并进行质控,3小时内即可获得至少6个靶标基因的一定程度上拷贝数浓度,融合传统微滴式和芯片式优势,被称为下一代数字PCR技术。只需一步移液操作,将PCR反应液加载于创新型微流控芯片,naica®六通道微滴芯片数字PCR系统即可自动生成单层平铺的2D微滴阵列,随后对每个微滴进行温度均匀一致的PCR扩增后,进行六通道荧光信号采集,计数阴阳性微滴,通过泊松分布计算获得靶标基因一定程度上拷贝数浓度。珠三角医疗系统认证数字PCR原理影响dPCR定量结果的因素:仪器采用的分散方式与数量、溶液稀释方法、分散体积的准确性以及结果表达方式。

数字PCR是一种核酸分子定量技术。当前核酸分子的定量有三种方法,光度法基于核酸分子的吸光度来定量;实时荧光定量PCR(RealTimePCR)基于Ct值,Ct值就是指可以检测到荧光值对应的循环数;数字PCR是的定量技术,基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量,是一种定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法,将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中,每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后,有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号,没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积,就可以推算出原始溶液的核酸浓度。

在荧光定量PCR应用已经如此的情况下,缘何数字PCR仍然能横空出世?中心点在于荧光定量PCR尽管为科研和临床市场应用提供了非常重要的检测工具支撑,但仍然有尚未被满足的客户需求。荧光定量PCR需要基于标准品制作的标准曲线进行定量,属于相对定量,操作较为复杂,且终端用户对其结果的重复性、灵敏性、精密度、分辨率、对PCR反应抑制剂的耐受性等方面有更高的期待。数字PCR通过将反应体系进行有限稀释至成千上万的反应单元中,实现了核酸靶标的单分子扩增。PCR扩增结束后,基于终点法对阳性液滴数和总液滴数进行计数,结合泊松分布原理,从而实现对起始样本的定量。其极大地简化了操作步骤,并且大幅提高了检测性能,尤其在低丰度或较低丰度的核酸检测上(灵敏性可达0.001-0.0001%),其优异的性能得到了终端用户的认可。模板 DNA 量越多,荧光达到域值的循环数越少,即 Ct 值越小。

数字PCR技术的出现不是为了完全取代原有分子诊断技术,而是更好的补充和完善现有技术平台。数字PCR为不同应用场景下的多样化核酸检测需求提供了新的思路,尤其是在临床检测方面。国产数字PCR企业在商业化应用方面,也不断“攻城略地”。数字PCR作为当下灵敏的核酸检测技术,尽管目前国产数字PCR企业异军突起,在临床市场中实现了弯道超车,但未来仍然需要聚焦客户需求,不断夯实底层创新,同时在检测成本、自动化、试剂盒申报注册、出海国际化等方面不断努力,提供更为的解决方案。国际局势,波谲云诡。在百年未有之大变局,实现中华民族的伟大复兴,需要国内企业瞄准技术高地,以争分夺秒的精神,解决技术"卡脖子"的难题,不断攻坚克难,自主创新,在与国际品牌的同台竞技中,彰显中国实力。数字PCR的两大应用场景在于基因检测、无创出生缺陷筛查。珠三角锐讯数字PCR试剂盒

数字PCR主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法。医疗系统认证数字PCR技术

PCR已成为分子诊断领域重要的技术手段之一,占据分子诊断市场的半壁江山。数字PCR是一代PCR技术,也是当前灵敏度和定量精度比较高的分子检测技术。但数字PCR使用成本仍然相对较高,检测靶点数少(一般≤6靶点/反应),阻碍了其在临床中的大规模应用,提高数字PCR的多重检测能力迫在眉睫。基于荧光通道数的增加和基于探针浓度梯度增加,均可以在一定程度上提高数字PCR检测重数,然而只能达到"线性"增加的目的。基于探针浓度梯度的多重检测技术虽然光'f明显增加多重能力,但由于无法避免交叉反应现象,不能确保获得位点特异性的分簇,因此稳定性不足、灵敏度较差,难以满足临床级别的数据要求。而基于创新的且数字PCR独特适用的荧光编码技术可以实现“指数”级的多重检测,颠覆性的提高数字PCR检测重数,覆盖临床应用多场景需求。医疗系统认证数字PCR技术

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