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10x空间转录组

来源: 发布时间:2021年12月04日

10x Genomics空间转录组的实现原理是什么?10x Genomics空间转录组用于文库构建的每张载玻片上有四个捕获区域,每个捕获区域的大小为6.5x6.5mm,包含5000个被条形码标记的点(barcoded spots),每个点的直径为55 μm,点和点之间中心的距离为100 μm,并且每个点都有一个barcode序列。组织切片的细胞中会释放出mRNA,迁移到每个spot的mRNA会被标记上相应的barcode序列,然后进行文库构建并进行测序。根据数据的条形码信息对数据进行分析,以确定哪些数据来自哪个位置,从而实现空间基因表达的可视化。 只听名字就想尝试,不清楚空间转录组的原理及通过该技术究竟能拿到什么结果。10x空间转录组

 **近,空间转录组学研究炙手可热。细胞及其在组织样本中的相对位置之间的关系对于理解疾病病理可能至关重要。空间转录组学是一项开创性的技术,它使科学家能够测量组织样本中的所有基因活性,并绘制出发生该活性的位置的图。该技术已经导致了新发现,这些新发现将有助于帮助科学家更好地了解生物过程和疾病。10x Genomics空间转录组技术可以应用于**、免疫、发育、神经和病理等研究方向。欧易生物具有上百例空间转录组项目执行经验,致力通过质量的服务,助力各位科研工作者取得新的突破。福建空间转录组使用空间转录组避免了组织中细胞位置信息的丢失。

1. 10x  Genomics空间转录组用于文库构建的每张载玻片上有四个捕获区域,每个捕获区域的大小为6.5x6.5mm,包含5000个被条形码标记的点(barcoded spots),每个点的直径为55 μm,点和点之间中心的距离为100 μm,并且每个点都有一个barcode序列。10X Visium空间转录组的实验主要分为两部分:组织学板块和组学板块。组织学板块包括样品的包埋、切片、固定、染色及成像,记录切片的形态学信息;组学板块包括cDNA的合成、扩增、接头连接和测序,记录切片的转录本信息和空间位置信息 。

高通量空间转录组学数据的处理和分析需要新颖的方法和工具支撑,尤其是在预处理、scRNA-seq 数据的空间重构、基于微阵列数据的细胞类型去卷积、空间高变基因的识别、细胞间相互作用的推导等。scRNA-seq 技术的进步启发了利用高分辨率转录组定量分析与空间转录组学数据的互补性质的新方法。对于未进行转录组测序的 smFISH 和 ISS 数据,可通过 scRNA-seq 数据估算空间数据中未分析的基因的表达模式。此外,“空间转录组学”这一术语的变体,也用于描述将转录本定位到细胞器的技术(例如 APEX-seq),尽管该技术没有记录任何空间坐标。空间转录组测序技术在进行 HE 染色的同时需要保证获取组织基因表达信息。

空间转录组技术包含两种芯片,分别为组织优化芯片(Tissue Optimization)和基因表达芯片(Library Preparation)。组织优化芯片用来摸索组织透化的比较好时间,基因表达芯片用来进行正式样本的空间转录组实验。其中基因表达芯片上有 4 个捕获区域,每个区域大小为 6.5mm×6.5mm,每个捕获区域中有 5000 个带有特异地址序列的探针簇,称为 barcoded spots,每个 spot 直径为 55um,包含数百万个用于捕获的 oligo 探针序列,相邻两个 spot 的中心距离为 100um。探针序列的结构为:测序引物结合序列,16nt 的位置序列,12nt 的 UMI 序列以及 30nt 的 oligo-dT 序列。HE 染色适用于空间转录组的组织学呈现方法。广西欧易生物空间转录组有什么用

如何通过“HE染色”判断空间转录组项目样本是否为“好的样本”呢?10x空间转录组

Visium空间转录组能够做何种组织类型以及推荐切片厚度是什么?10X Genomics测试过很多组织类型,绝大多数都可以用于空间转录组的分析。下图是他们官网上测试过的组织类型的列表,测试过的组织都可以运用在空间转录组的分析上面。但建议用户用基因表达玻片做正式实验前,务必用组织优化的玻片测试一下,看组织能否用于空间转录组的实验,同时也找到比较好的组织通透时间。切片厚度基本上以10µm为主,但也有少量组织例外。欧易生物具有上百例空间转录组项目执行经验,致力通过质量的服务,助力各位科研工作者取得新的突破。10x空间转录组

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