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上海悬浮细胞转染试剂配方

来源: 发布时间:2022年06月08日

确定希望输送的运载物

(如DNA、RNA或蛋白质)

根据不同实验类型,我们可能需要将不同的运载物输送到细胞内部,包括**常见的DNA,用于基因编辑的siRNA,能够更快表达蛋白的mRNA,CRISPR-Cas9甚至是体内转染。正确的了解您希望输送的运载物是选择可靠转染产品的第一步。

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希望转染的细胞类型

转染的细胞类型可简单分为两大类,连续细胞系和原代细胞。

连续细胞系具有无限增殖的潜能,通常要比原代或有限细胞更易处理。但由于此类细胞经历过基因改变而变得具有无限增殖能力,它们在培养过程中的表现可能无法必然地反映体内状态。 转染的细胞类型可简单分为两大类,连续细胞系和原代细胞.上海悬浮细胞转染试剂配方

胞因素用低代数的细胞293T细胞非常重要!!当然也要保证细胞状态特别好,没有细微污染,铺板均匀。饱满状态好的细胞才可以产生较高滴度的***哦!载体系统在实验中**常见的慢***载体系统有三质粒系统、四质粒系统,当然使用三质粒系统的小伙伴居多,一定要选择成熟商业化的载体系统!载体构建和质粒抽提纯化我们要注意是否构建时导致质粒载体重组或某个部件缺失,或污染别的质粒、杂物?中抽纯化是否污染?要养成同时做阴性对照的习惯:建议目的基因载体和阴性对照GFP载体是同一批,且建议每次包装都如此操作,要保证目的基因的表达载体构建纯化良好,质粒间比例得当,并且对质粒进行酶切验证。转染试剂原理国产转染试剂制作原理是什么?

基于阳离子聚合物的转染试剂,带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,并通过内吞作用进入细胞。其又分为树枝状阳离子聚合物和线性阳离子聚合物两类,前者细胞毒性相对较大,后者细胞毒性较小,但其转染效率都高于脂质体转染,适用也较为广范。以上单一成分的转染试剂或聚焦于提高效率或着重于降低细胞毒性,可谓鱼和熊掌不可兼得也。新一代转染试剂,不局限于单一成分,混合了不同 配方的脂类(非脂质体)、加上蛋白质组分、以及各种的 成分,兼具了转染效率高和细胞毒性小的优势,且操作更加简单,易于高通量。

对CHO细胞转染效率的比较右图:使用以上转染试剂将编码荧光素酶蛋白的cDNA(phRL-CMV)和绿色荧光蛋白GFP的cDNA按照生产商的提供的转染步骤分别转染到CHO细胞。在转染24小时后,荧光素酶的活性使用Beckman公司的化学发光监测器测定;GFP阳性细胞率使用BD公司的FACS检测。左图:LipoD293试剂(升级版)和Lipofecatmine2000(L2K),TransIT以及Fugene6的价格比较(美元/1000微升)。所有的价格是从生产制造商的网站上收集对CHO细胞转染效率的比较右图:使用以上转染试剂将编码荧细胞转染必备——高效低毒转染试剂.

原代细胞直接分离自组织并在适当条件下增殖,因此,它们的形态学和生理特征和体内状态更为相似。但相对于连续细胞系,它们通常更难培养和转染。在经过***次传代培养之后,原代培养物变成了一种细胞系。源自于原代培养物的细胞系具有有限的寿命(即它们是有限细胞系),且随着传代的进行,具有比较高的生长能力的细胞逐渐占据支配地位,从而造成了细胞群内的基因型和表型接近一致的情形。相对来说,这一类细胞要比原代细胞使用起来更为方便,尤其是稳定转染的克隆传代。每孔培养体积均为100μL,细胞数目在105左右。悬浮细胞转染试剂作用

随后分离血清并检测FVII蛋白的水平(Biophen 显色检测)。上海悬浮细胞转染试剂配方

基于阳离子聚合物的转染试剂,带正电的聚合物与核酸带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用,并通过内吞作用进入细胞。其又分为树枝状阳离子聚合物和线性阳离子聚合物两类,前者细胞毒性相对较大,后者细胞毒性较小,但其转染效率都高于脂质体转染,适用也较为广范。以上单一成分的转染试剂或聚焦于提高效率或着重于降低细胞毒性,可谓鱼和熊掌不可兼得也。新一代转染试剂,不局限于单一成分,混合了不同配方的脂类(非脂质体)、加上蛋白质组分、以及各种的成分,兼具了转染效率高和细胞毒性小的优势,且操作更加简单,易于高通量。上海悬浮细胞转染试剂配方

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