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pei转染试剂配方

来源: 发布时间:2022年06月03日

转染 48 小时后,使用尼康荧光显微镜 GFP 荧光进行成像(左侧四幅图),A:LipoD293; B:293fectin;C:Xfect 和 D:Fugene 6.  带有 6xHis 标记的 GFP 荧光蛋白使用 Ni-NTA 亲和柱技术实现分离。5 微升洗脱液载入 SDS-PAGE 凝胶电泳分离并进行 Coomassie 亮蓝染色(右上图 E),道 1 为 LipoD293293、道 2 为标准蛋白分子、道 3 为 Xfect、道 4 为 293fectin 和道 5 为 Fugene 6。这四种转染试剂产生蛋白质的效率被进一步定量(见右下图 F)。产生慢***的比较

通过 LipoD293™ 试剂(升级版)和 Lipofectamine LTX(LTX)试剂将三个 cDNAs 共转染进 293T 细胞。一个 GFP 载体,pHR-SIN-cppt-CMVEWP 被用来测定慢***的滴度。在 24 孔板中每孔加入 1x10^5 293T 细胞,其次是分别添加不同量的慢定都上清液,1 微升(上图)和 10 微升(下图)。 国产转染试剂制作原理是什么?pei转染试剂配方

转染是将外源核酸导入真核细胞的过程,是细胞和分子生物学研究的重要工具,也是大部分的生物和分子生物领域的科研党们绕不开的话题。然而常常听到的抱怨是"转染效率太低""转染完细胞全漂了""转染后忘记给细胞换液了",真所谓辛辛苦苦实验N多回,一夜回到解放前……众所周知,影响转染成功的因素非常多,包括细胞质量、核酸质量、微生物污染、转染试剂等。各种细胞使用的转染条件都可能不同,现实中也并没有一种放之四海而皆准的方案。sirna转染试剂用于基因编辑的RNP转染试剂.

LNCap细胞的培养和传代严格由ATCC建议的操作步骤进行,与pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,共1.0微克)共转染(6孔板中每孔的量),并用LipoD293™试剂(左图)和FugeneHD(右图)分别按照生产制造商的科学实验步骤进行转染。转染24小时后,用尼康Eclipse2000荧光显微镜检测GFP荧光,以此来评价转染效率。在血清和***的存在下,HepG2和SaoS-2细胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分别转染达到95%的细胞融合。转染48小时后,分别通过Zeiss510激光共聚焦显微镜和β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测效率。

图5.Invivofectamine3.0试剂与靶向FVII的siRNA在单次静脉注射后可在肝脏中引起剂量反应的敲低现象。Invivofectamine3.0试剂与靶向FVII的AmbioninvivosiRNA以0.02到2mg/kg的剂量进行注射。随后分离血清并检测FVII蛋白的水平(Biophen显色检测)。持续敲低能力在单次注射后可观察到更长的敲低时间图6.使用三种不同浓度的靶向FactorVII(FVII)的siRNA研究剂量效应。siRNA分子与Invivofectamine3.0试剂形成复合物后分别以1、0.5、及0.25mg/kg的剂量进行注射。在第2、5、9、16、23及30日收集血清,并使用显色法对血清进行分析以确定FVII蛋白的敲低效果。低毒性转染后6h观察细胞状态,并更换培养基,继续培养24 h后收取细胞,用PBS洗涤3次以上,以备RNA抽提。

细胞转染实验是生物医学实验室中**常规的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子导入到靶细胞内。目前主要有三种主流方法:生物转染,物理转染和化学转染。其中生物转染主要是利用***等微生物作为基因导入载体,以慢***、腺***和腺相关***等**常见,其侵染效率可以达到90%以上,但常因安全性等问题,很多实验室对其敬而远之。物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因***,无论哪一种都需要特定的设备,且一分钱一分货,性能好的价格也都很性感电转化化学转染方法是生物医学研究中**常用的转染方法,主要包括两类:阳离子脂质体和阳离子聚合物。其基本原理是利用阳离子的化学分子与带有负电荷的核酸通过正负电荷作用形成稳定的复合物。转染产品知多少——siRNA转染试剂.动物细胞转染试剂供应商

试剂可在单次静脉注射后即可在肝脏中实现靶向敲低。pei转染试剂配方

siRNA,加入HiperFect转染试剂混匀并温育5-10min,将混合物逐滴加入培养皿中混匀,培养细胞直到适当的时候检测基因沉默效果。这个快速操作流程简便到还可以用于“反向转染”,方便至极。当然,习惯用传统方法也是可以的,只要培养到细胞汇合度50%—80%进行转染就可以了。没有禁用血清、***的困扰,HiperFect真的是将实验简化到了***。适合多种细胞类型:HiPerfect可高效转染多种细胞类型,包括HeLa、HeLaS3、HEK293、NIH/3T3、Huh-7、HepG2、MCF-7、HUVEC和NHLF等。对于原代细胞,产品手册中列出了转染原代HUVEC、成纤维细胞、角质细胞、上皮细胞和平滑肌细胞的操作步骤,贴心pei转染试剂配方

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