注意冷冻保护剂之品质。DMSO应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22micron FGLP Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650)，以5～10ml小体积分装，4℃避光保存，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂级等级，以高压蒸汽灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。本方法中先制备双倍冻存液，可避免DMSO直接加入时释放的热量对细胞的损伤。缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高渗，可降低细胞受损。DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化，可换用10%甘油冻存。 细胞冻存液要不要含血清?武汉配制好的细胞冻存液
解冻
解冻后，应该立即铺板在预先包被好的培养皿中。
开始之前，提前准备好以下材料：试管，恢复至室温的培养基，预先包被的培养板，确保整个解冻复苏程序可以在**短的时间内完成。
注意：不要在37°C水浴中加热培养基。
1. 在37°C水浴中快速解冻，持续温和的在水中晃动冻存管，直到剩余少量细胞还处于结冰状态。
2. 水浴中取出冻存管，用70%的酒精或异丙醇擦拭除菌。
3. 用2 mL的血清移液管把细胞悬液转移到一个15 mL的锥形试管。
注意：用2 mL的血清移液管代替1 mL的***头可以减少细胞聚集体的分解。 武汉配制好的细胞冻存液细胞冻存液具体有哪些?
细胞这一微小的生命体和地球的其它生命相似，机体的主要成份是由液态的H2O组成，但是其结构微小复杂，内部任何的物理损伤对于它都是致命的。水在低于零度的条件下会结冰。如果将细胞悬浮在纯水中，随着温度的降低，细胞内外的水份都会结冰，所形成的冰晶会造成细胞膜和细胞器的破坏而引起细胞死亡，这种因细胞内部结冰而导致的细胞损伤称为细胞内冰晶的损伤。如果将细胞悬浮在溶液中，随着温度的降低，细胞外部的水分会首先结冰，从而使得未结冰的溶液中电解质浓度升高。
冻存/解冻标准流程TBD598、TBD698可以按照下列步骤操作，TBD798需要先使用自体血浆配制然后冻存。建议冻存细胞密度为1×106-107个/ml一.冻存1.在室温以300xg离心5分钟。2.轻轻吸走上清液，注意不要扰动细胞团。3.用血清学吸管以1mL的细胞冻存液重悬细胞，打散细胞团时。4.用2mL的血清学吸管将1mL的细胞转移到标记好的冻存管中。5.用以下方法冻存细胞:推荐使用缓速降温方法，每分钟降低1度，随后可以在-196°C液氮长期保存。不推荐在-80°C长期保存。逐步降温法：-20°C保存2个小时，然后-80°C中保存2个小时，随后可以在-196°C液氮中长期保存。细胞冻存液避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。
细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开***开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%．15%的甘油或二甲基亚砜(DMSO)，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。冻存细胞负**概放多久?武汉配制好的细胞冻存液
细胞冻存液可以放多久?武汉配制好的细胞冻存液
用以下方法冻存细胞:
4℃放置15-30分钟
（一定不能省略该步骤，否则冻存液无法完全渗透过细胞膜进入细胞起保护作用）
① 缓速降温方法（以使用需异丙醇的Nalgene程序降温盒为例，冷冻细胞的过程中可以辅助实现缓慢降温，以达到近似于1℃/分钟）：-80℃过夜→液氮长期保存。
（不推荐在-80℃长期保存；异丙醇易挥发，并且容易吸收空气中的水分，建议使用5次后更换）
② 逐步降温法：-20℃保存2小时，然后-80℃中保存2小时，随后可以在-196℃液氮中长期保存。 武汉配制好的细胞冻存液
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